一株感染铜绿假单胞菌的双链RNA噬菌体PaP6的分离与鉴定.PDF

微生物学通报 May 20, 2016, 43(5): 948−954 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.151019 研究报告 一株感染铜绿假单胞菌的双链 RNA 噬菌体 PaP6 的分离和鉴定 1 1 1 2 1 1* 郭棵棵 杨雨卉 沈伟 费文斌 乐率 胡福泉 (1. 400038) (2. 210000) 摘 要：【目的】鉴定一株新分离的铜绿假单胞菌噬菌体PaP6 的生物学特性。【方法】利用铜 绿假单胞菌临床分离株 PA038 为宿主，从西南医院污水中分离得到一株裂解性噬菌体PaP6 ， 观察其噬斑特点；氯化铯密度梯度离心纯化噬菌体颗粒后，用透射电子显微镜观察噬菌体形态； 提取PaP6 基因组，通过DNA 酶和RNA 酶酶切，做基因组酶切图谱分析；按照感染复数(MOI) 分别为 10、1、0.1 、0.01 、0.001 和0.000 1 加入噬菌体和宿主菌，裂解细菌后，测定噬菌体滴 度；以MOI=10 的比例加入噬菌体和宿主菌，绘制一步生长曲线；用112 株铜绿假单胞菌临床 分离株检测PaP6 宿主谱。【结果】PaP6 的噬斑直径约2 mm−4 mm ，圆形透明，边缘清晰；PaP6 噬菌体呈多面体立体对称的头部，直径约45 nm；酶切图谱表明PaP6 基因组对DNase 不敏感， 对RNase 敏感，未酶切基因组具有3 节段双链RNA (dsRNA) ，长度分别约为9.0 、4.5 、3.5 kb ， 共约 17 kb；当 MOI 为 0.1 时 PaP6 感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高，达到 3.4×109 PFU/mL ；用一步生长曲线描绘了其生长特性；PaP6 可以感染40.1% 的临床分离株，是 一株比较广谱的噬菌体。【结论】首次报道了一株铜绿假单胞菌的dsRNA 分节段噬菌体，分类 学上属于囊病毒科，该噬菌体具有较广的宿主谱，在噬菌体治疗领域具有应用前景。 关键词：铜绿假单胞菌噬菌体，双链RNA 噬菌体，囊病毒科噬菌体 Isolation and characterization of PaP6, a newly isolated Pseudomonas aeruginosa bacteriophage containing three dsRNA genomic segments GUO Ke-Ke1 YANG Yu-Hui1 SHEN Wei1 FEI Wen-Bin2 LE Shuai1 HU Fu-Quan1* (1. Department of Microbiology, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China) (2. Phagelux (Nanjing) Bio-tech Company Limited, Nanjing, Jiangsu 210000, China) Abstract: [Objective] To characterize a novel Pseudomonas aeruginosa phage PaP6 via its biological properties. [Methods] Double-layer agar culture method was applied to observe the plaques of PaP6. Phage particles were examined by electron