微小RNA-146a调控肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1.PDFVIP

中华危重病急救医学 2014 年 5 月第 26 卷第 5 期 ChinCritCareMed ，May2014 ，Vol.26 ，No.5 ·300 · ·论著· 微小 RNA-146a 调控肺泡巨噬细胞中白细胞介素 -1 受体相关激酶 1 和肿瘤坏死因子受体 相关因子 6 的表达 黄萍 刘芬 曾振国 黄彩雪 邵强 夏亮 揭克敏 钱克俭 【摘要】 目的 观察转染微小 RNR-146a（miR-146a ）对肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1 受体相关激酶 1 （IRAK-1 ）和肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF-6 ）表达的影响，为探讨miR-146a 对肺泡巨噬细胞炎症反应 的调控机制奠定基础。 方法 将体外培养大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383 分为 miR-146a 模拟物（mimic ）组和阴性 对照组，分别加入 50nmol/LPre-miRmiR-146a 前体和 Cy3 标记的 Pre-miR 阴性对照进行转染，转染 24h 后收 集细胞，采用实时荧光定量逆转录 - 聚合酶链反应（RT-qPCR ）检测细胞中miR-146a、IRAK-1mRNA、TRAF-6 mRNA 的表达，采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot ）检测细胞中IRAK-1 和 TRAF-6 的蛋白表达。 结果 t ＝-6.643，P ＝0.003）。细胞中IRAK-1 miR-146amimic 组 miR-146a 表达较阴性对照组上调了（24.55±6.14 ）倍（ t ＝2.701，P ＝0.054）和（1.19±0.16）倍（t ＝ 和 TRAF-6 的 mRNA 表达分别为阴性对照组的（1.16±0.10）倍（ P ＝0.112）。 而 IRAK-1 和 TRAF-6 的蛋白表达分别为阴性对照组的 73.0% （t ＝-9.353，P ＝0.001）和 2.032 ， t ＝-6.839，P ＝0.002）。 结论 miR-146amimic 能成功转染肺泡巨噬细胞 NR8383 ； miR-146a 过表达后， 64.1%（ 能有效下调肺泡巨噬细胞中 IRAK-1 和 TRAF-6 的表达，其机制可能是在蛋白翻译水平的抑制。 【关键词】 微小 RNA-146a ； 白细胞介素 -1 受体相关激酶 1； 肿瘤坏死因子受体相关因子 6 ； 肺泡 巨噬细胞； 炎症反应 The effect of transfected microRNA-146a on expression of interleukin-1 receptor-associated kinase 1 and tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 in alveolar macrophages Huang Ping* ， Liu Fen ， Zeng Zhenguo ， Huang Caixue ， Shao Qiang ， Xia Liang ， Jie Kemin ， Qian Kejian. * State Drug Clinical Trial Agency ， the First Affiliated Hospital of Nanchang University ， Nanchang 330006 ， Jiangxi ， China Corresponding author ： Qian Kejian ， Email ： qkj0607@ 【Abstract 】 Objective ToobservetheeffectoftransfectedmicroRNA-146a （miR-146a ）onexpression of interleukin-1receptor-associatedkinase1（IRAK-1 ）andtumornecrosi