渗透压对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（４）：６１～６６ 渗透压对产甘油假丝酵母甘油合成与 胞内磷积累的影响 １，２ ２ ２ ２ 谢　涛 　方慧英 　诸葛斌 　诸葛健 （１湖南工程学院化学化工系　湘潭　４１１１０４　２江南大学工业生物技术教育部重点实验室　无锡　２１４０３６） 摘要　研究了不同磷浓度时渗透压对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响。结果表 明，不同磷含量时，产甘油假丝酵母甘油合成越多，分泌至胞外和积累于胞内的甘油也越多，其最 大甘油合成量存在一个最适渗透压。同样；在相同渗透压下，其最大甘油合成量也存在一个最适 磷浓度。在相同磷含量时，渗透压增高能够促进胞内聚磷酸盐积累；当渗透压相同时，培养基中 磷含量增加，胞内游离磷和聚磷酸盐均增加。在生长稳定期后期，富磷可以促进胞内游离磷和聚 磷酸盐积累显著增加。经分析发现，产甘油假丝酵母胞内积累甘油与聚磷酸盐，可能对克服对数 生长期细胞数量少而渗透压胁迫大的困境发挥了极其重要的作用，从而能维持其生长稳定期较 高的生物量、细胞存活率和甘油产量。 关键词　渗透压　甘油合成　胞内磷积累　产甘油假丝酵母 中图分类号　ＴＱ９２ 　　甘油作为酵母渗透压调节中相容性溶质的重要意义 物研究中心提供。 已成为公认的事实，且胞内甘油浓度受胞外渗透压调 　　种子培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖 １００，尿素２，玉米浆 ８， 节［１～４］。在渗透压胁迫过程中，Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ积 自然ｐＨ值。 累甘油的一个重要途径是增加其甘油的合成速率。同时， 　　合成发酵培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖 １７０～１８０，ＫＨＰＯ ２ ４ 有些酵母菌也能通过在其胞内积累聚磷酸盐（ＰｏｌｙＰ），增强 ０．４（适磷）、０．８、１．２和 １．６（富磷），ＭｇＳＯ ·７ＨＯ ４ ２ 其对营养饥饿、化学抑制剂、重金属污染、紫外辐射、氧化破 ０．５，ＣａＣｌ０．１，微量元素溶液 １ｍｌ／Ｌ，ｐＨ值不调，其渗 ２ 坏、高温、强酸强碱和高盐高渗等不良环境的抵抗力，从而 透压通过调节ＮａＣｌ浓度来控制。 ［５～８］ 提高在生长稳定期的存活率 。因此，为了较清楚地了 １．２　发酵方法 解Ｃａｎｄｉｄａｇｌｙｃｅｒｉｎｏｇｅｎｅｓ产甘油发酵过程中高渗透压、甘 　　从刚转接培养好的新鲜斜面上挑取一环菌株，接 油合成与ＰｏｌｙＰ积累之间的关系，本文将针对不同磷酸盐 入５００ｍｌ摇瓶中（种子培养基装液量为５０ｍｌ），于往复 浓度下渗透压对Ｃ．ｇｌｙｃｅｒｉｎｏｇｅｎｅｓ甘油合成与胞内ＰｏｌｙＰ 式摇床上３０℃振荡（振幅１０ｃｍ，振动频率１１０次／ｍｉｎ） 积累的影响开展研究，以期为进一步揭示ＰｏｌｙＰ的生理作 培养１９ｈ即可用于接种。再按５％（ｖ／ｖ）的接种量将种 用打下基础。 子液接入装有６０ｍｌ合成发酵培养基的５００ｍｌ摇瓶中进 １　材料和方法 行发酵，发酵条件同种子培养。 １．３　测定方法 １．１　菌株和培养基 ［９］ １．３．１　甘油的测定　采用高碘酸钠变色酸法 。 　　菌株：Ｃａｎｄｉｄａｇｌｙｃｅｒｉｎｏｇｅｎｅ