微波辅助蛋白质水解-反相高效液相色谱法测定罗非鱼皮中的羟脯氨酸.pdf

第46卷 第3期 淡 水 渔 业 2016年 5月 Vo1．46 No．3 FreshwaterFisheries Mav．2016 微波辅助蛋 白质水解一反相高效液相色谱法 测定罗非鱼皮 中的羟脯氨酸 赵 艳，宋 军，杨发树，张艳红，张凤枰，刘耀敏，范秀丽 (通威股份有限公司水产畜禽营养与健康养殖农业部重点实验室，成都 610041) 摘要 ：为测定罗非鱼(Oreochromisniloticus)皮中羟脯氨酸含量，建立了微波辅助蛋白质水解一反相高效液相色谱 法。实验采用9一芴基甲氧基羰酰氯 (FMOC—C1)为衍生试剂 ，应用ZORBAXSB—C 色谱柱，以0．05mol／L的醋酸 钠溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱 ，DAD检测器在262nm处进行检测 ，外标法定量。结果显示 ，羟脯氨酸线 性关系良好，相关系数为0．9999，回收率 92．00％一103．25％，相对标准偏差2．53％ ～3．61％，检 出限为0．2 mg／g。 关键词：微波辅助蛋白质水解 ；反相高效液相色谱法；罗非鱼皮；羟脯氨酸 中图分类号：TS254．7 文献标识码：A 文章编号：1000—6907一(2016)03-0099．05 Determinationofhydr0xypr0linein theskinofOreochromis nUoticusbyreversed—phasehighperformanceliquidchromatography afterm icrowave—assisted acidhydrolysisofprotein ZHAO Yan，SONGJun，YANGFa-shu，ZHANGYan—hong， ZHANG Feng—ping，LIU Yao—rain，FAN Xiu·li (KeyLaboratoryofAquatic，Livestock，PoultryNutritionandHealthyCulturing， Min~tuofAgriculture，TongweiCo．，Ltd．，Chengdu 610041，China) Abstract：Amethodwasestablishedforthedeterminationofhydroxyprolineintheskinoftilapia(Oreochromisniloticus)by reversed—phasehighperformanceliquidchromatographyaftermicrowave—assistedacidhydrolysisofprotein．Afterderivat— izationby9-fluorenylmethylehloroofrmate(FMOC—C1)，separationandquantificationwasachievedonaZORBAXSB—Cl8 columnbygradientelutionwithmethanoland0．05moULsodium acetatebuffer．Thedetectionwascarriedoutwithdiode a咖ydetector(DAD)byabsorbanceat262nm．Theexternalstandardcalibrationcurveswereusedforquantification． Thereweregoodlinearcorrelationsforhydroxyproline(r=0．9999)．Averagespikerecoveryofhydroxyprolinewas 92．00％ 一103．25％ ．with relativestandarddevitations2．53％ ～3．