第二章 微生物的纯化和显微镜(14级期末总结用).pptVIP

第二章  微生物的纯培养和显微技术 Microbial Pure Culture Techniques and Microscopy 在研究中所使用的微生物培养群体： 培养物(culture) ：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。 混合培养物(mixed culture)：含有多种微生物的培养物。 纯培养物(pure culture) ： 只有一种微生物的培养物。 通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果 纯培养技术是进行微生物学研究的基础！ 纯培养技术—把特定的（目标）微生物从自然混杂存在的状态中分离、纯化出来，以便被研究和利用。 显微技术—包括显微镜的正确使用、显微标本的制作、观察、测定、分析及记录等内容。 Outline 第一节 微生物的分离和纯培养 一、无菌技术 五、选择培养分离 二、用固体培养基分离纯培养 六、二元培养物 三、用液体培养基分离纯培养 七、微生物的保藏 四、单细胞（单孢子）分离 第二节 显微镜和显微技术 一、显微镜的种类及原理 二、显微观察样本的制备 第一节 微生物的分离和纯培养 从混杂的群体中分离特定的某一种微生物， 是研究和利用微生物的第一步。 一、无菌技术(aseptic technique, sterile technique) 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染； 培养微生物本身不污染操作环境。 无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染，其自身也不污染操作环境的技术。 1. 微生物培养的常用器具及其灭菌 常用器具： 试管（test tube） 三角烧瓶（flask） 培养皿（平皿）（Petri dish） 灭菌： 灭菌（sterilization）—完全去除或杀死器物表面和 内部的一切微生物。 消毒（disinfection）—消灭或减少病原微生物，而不是消灭所有的微生物。 灭菌方法 ◆热力灭菌（Heat sterilization） ——干热灭菌（Dry heat） ——湿热灭菌（Moist heat） ◆过滤灭菌（Filtration） ◆化学灭菌(Chemical agents) ◆辐射灭菌（Radiation） 1.微生物培养的常用器具及其灭菌 培养基 (culture medium) : 培养微生物的营养物质。 固体培养基：是用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。由Koch建立，已有100年的历史。 培养平板（culture plate, 简称平板）：盛有固体培养基的平皿。 培养斜面（culture slant , 简称斜面)：倒入试管并摆放成斜面得固体培养基，当培养基凝固后通常称作“斜面”。 二、用固体培养基分离纯培养（平板分离法） 菌落（colony）： 单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体 培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼 可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体。 当固体培养基表面众多菌落连成一片 菌苔（lawn） 二、用固体培养基分离纯培养 固体培养基分离法 （见教材 图2-4、2-5、2-6） 固体分离法 (shake tube method) 二、用固体培养基分离纯培养 稀释倒平板法 涂布平板法 平板划线法 稀释摇管法 固体培养基分离 液体培养基分离 单细胞（孢子）分离 获得微生物 纯培养的方法 稀释法 显微操作 富集培养：造成有利于某种菌生长的环境 选择培养分离 用选择平板直接分离：抑制使大多数微生物不能生长，或具区别特征的直观结果 七、菌种保藏 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则 生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异 b）污染 c）死亡 （一）菌种的衰退与复壮 1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有 原有典型性状的菌种。 2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种 维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮： a）纯种分离； b）通过寄主体进行复壮 （二）防止衰退的措施 1）减少传代次数； 2）创造良好的培养条件； 3）经常进行纯种分