发酵实验报告根霉曲的制备及根曲霉糖活力的测定.doc

本科学生实验报告 本科学生实验报告 学号 104120440 姓 名 孙 永 升 学院 生命科学学院 专业、班级 10生物技术 实验课程名称 发 酵 工 程 学 实 验 教师及职称 唐 湘 华 讲 师 开课学期 2012 至 2013 学年 第二学期 填报时间 2013 年 4 月 3 日 云南师范大学教务处编印 实验名称 实验方式 小组成员 实验一、 根霉曲的制备及根曲霉糖化力的测定 小组合作 XX XX XX XX 实验目的 1.1掌握固体发酵的基本操作步骤； 1.2了解根霉曲制作工艺和基本原理； 1.3了解糖化酶的测定方法； 1.4对糖化酶的糖化产物及糖化DE的计算； 1.5了解根霉曲在发酵生产过程中主要应用依据。 实验设备及材料 2.1材料：麦麸、 根霉AS3.866 2.2试剂：柠檬酸缓冲液、DNS、1%淀粉 2.3用具：电子天平、烧杯、三角瓶、纱布、报纸、移液枪、水浴锅、离心机、722U分光光度计、磁力搅拌器、高压灭菌锅、超净工作台、培养箱、研钵 3、实验原理及实验流程或装置示意图： 3.1根霉曲的制备原理： 通过固体发酵，根霉在麦麸培养基中进行大量繁殖，产生淀粉酶和糖化酶复合酶系；通过淀粉酶的液化和糖化酶的糖化作用将淀粉转化为还原单糖。 3.2根曲霉糖化力的测定原理： 淀粉是由葡萄糖通过α-1,4糖苷键构成的直、链淀粉和α-1,6位有分支的支链淀粉组成的，直链淀粉约含100-6000个葡萄糖单位，支链淀粉平均含6000个以上的葡萄糖单位，最高可达300万;淀粉酶首先酶解淀粉为小分子的糊精、寡糖和少量单糖；通过糖化酶的作用将小分子的糊精和寡糖降低为还原性的单糖。 3.3固体发酵一般流程如下： 保藏菌种 原料 ↓ ↓ 斜面活化 预处理 ↓ ↓ 固体三角瓶培养 蒸料 ↓ ↓ 固体浅盘培养 冷却 接种 培养 4、实验方法步骤及注意事项： 4.1根霉曲的制备步骤： 4.1.1培养基的配制与灭菌（约60%含水量） 麦麸20g＋20ml水 /人 → 放入烧杯拌匀（以组为单位）→ 分装于三角瓶 →包上纱布（至少6层） → 包报纸4层 → 包 扎→ 120℃灭菌1h→ 摇动打散瓶内培养基→冷却至约30℃ 4.1.2接种（ AS3.866 ） 液体接种，接种量5%→无菌操作进行接种（在超净工作台中进行）→摇匀 →包扎→ 在瓶壁上写上姓名、接种日期。 4.1.3培养 接种后的三角瓶倾斜平放→28℃培养24h → 扣瓶 →继续培养约24~48h →出料（烘干、磨碎）→根霉曲 4.2根曲霉糖化力的测定步骤： 4.2.1绘制标准曲线的方法 4.2.1.1先配制一系列浓度不同的标准溶液，用选定的显色剂进行显色，在一定波长下分别测定它们的吸光度A。 4.2.1.2浓度c为横坐标，OD为纵坐标，则得到一条拟合度较好的直线，称为标准曲线。 4.2.1.3然后使用用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，便可从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量。 4.2.1.5 0.1%葡萄糖标准曲线的制作： 取7支试管，编号，按照下表进行操作：如表一所示 试管编号 0 1 2 3 4 5 葡萄糖溶液 体积（ml） 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 葡萄糖含量 （mg） 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 缓冲液（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 DNS (ml) 3 3 3 3 3 3 定容总体积(ml) 15 15 15 15 15 15 OD（540nm） （葡萄糖标准贮备溶液的浓度为1mg/ml。） 表一 4.2.2酶液的制备 将小块状的根霉曲用研钵研碎，取2克根霉曲溶解到20毫升缓冲液中，混合搅 拌10分钟，离心取上清液液备用。 4.2.3糖化酶酶活测定 糖化酶酶活力的定义： 1毫升酶液在55℃，pH6.0的条件下，每分钟水解可溶性淀粉产生1umol葡萄糖的酶量为1个酶活力单位（U）（国标法糖化