6.酶的化学修饰.ppt

第四章 酶蛋白的化学修饰 提纲 §4.1 化学修饰的原理 ◆影响蛋白质功能基反应性的因素 ◆酶蛋白功能基的超反应性 ◆修饰剂反应性的决定因素 §4.2 化学修饰的方法学 §4.3 酶蛋白的修饰 对酶分子进行化学修饰，涉及两个方面的内容： 对酶分子的侧链基团，尤其是对酶分子活性中心的必需基团进行化学修饰，研究酶的结构和功能的关系； 通过对酶功能基团的修饰，改造酶的性能，增加酶的稳定性，降低免疫原性和抗原性等。 §4.1 化学修饰的原理 基本概念 ◆化学修饰：凡能通过化学基团的引入或除去而使蛋 白质共价结构发生改变，称为蛋白质的化学修饰。 ◆选择性化学修饰：指肽链侧链基团被化学试剂专一 性修饰，在较温和的条件下，以可以控制的方式使一种蛋白质同某些化学试剂起特异反应，从而引起单个氨基酸残基或其功能基发生共价的化学改变。 影响蛋白质化学修饰反应过程的因素： （1）蛋白质功能基的反应性； （2）修饰剂的反应性 一、影响蛋白质功能基反应性的因素 蛋白质功能基所处的环境强烈影响着它的物理和化学性质。蛋白质分子的表面特点也影响着化学试剂的接近，因此有必要考察微区对功能基和修饰剂的影响。 1.微区的极性 微区的极性是决定基团解离状态的关键因素之一。乙酸的pKa（在水中为4.76），在80%乙醇中增至6.87，而在100%乙醇中增至10.32。由此可看出，乙酸的羧基所处的微区的极性直接与介质的介电常数有关。随着介电常数的降低，羧基的pKa升高。 对Typ、Cys、和羧基影响大，对氨基和His影响较大。 2.氢键效应 天然蛋白质或它的离子通过氢键来维持其稳定性，也是使pKa发生改变的一个因素。 例如，2-氟酚的pKa比2-溴酚的pKa高0.7，这不是由于空间原因，而是由于氟与酚基形成氢键的能力比溴强。此外，在蛋白质的酚基和羧基间可形成氢键，此时羧基的pKa比正常值低，而酚基的pKa增高。 3.静电效应 用高分辨率的核磁共振法对His残基的电离行为进行研究表明，不同蛋白质中的His残基的pka是不同的。研究表明这些变化可能是由于带电基团相互影响所致。 碳酸酐酶的pKa是: 5.91、6.04、7.00、7.23 葡萄糖球菌核酸酶的pKa是：5.37、5.71、8.74、6.50 4.位阻效应 处于蛋白质表面的功能基，一般说来比较容易与修饰剂反应，但是如果烷基在空间上紧靠功能基，会使修饰剂不能与功能基接触，出现位阻效应。 如枯草杆菌蛋白酶的10个Tyr残基均在蛋白质的表面，而且酚羟基几乎在所有的情况下都没有形成氢键。但是如果对它进行彻底硝化和破坏后，10个Tyr残基只有8个被修饰，另外由于空间障碍引起修饰受阻。 酶蛋白功能基的超反应性 影响功能基反应性的因素： (1) 对功能基pka的影响； (2) 基团间的空间障碍； 影响超反应的因素： 1. 改变蛋白质功能基的pka； 2. 蛋白质功能基具有较大的亲和性； 3. 通过静电相互作用吸引试剂； 4. 试剂与靠近修饰部位的蛋白质区域间的立体化学适 应性； 5. 试剂结合等 此外，蛋白质和试剂的空间结构之间相互影响，也能加强修饰反应速度和反应专一性。 二、修饰剂反应性的决定因素 1.选择吸附 化学修饰前，修饰剂是根据各自特点选择性的吸附在低极性区或高极性区，并与蛋白质形成蛋白质-修饰剂的复合物。一旦复合物形成后，修饰区的速度加强了。这种速度的加强，部分是由于选择性吸附的结果。 2.静电相互作用 带电的修饰剂能被选择性吸附到蛋白质表面带相反电荷的部位，静电相互作用可使修饰剂向多功能部位中的一个残基定位或向多功能基的一侧定向。 3.位阻因素 蛋白质表面的位阻因素或底物、辅因子、抑制剂所产生的位阻因素可能阻止修饰剂与功能基的正常反应。 4.催化因素 修饰部位附近的其他功能基，如果起一般的酸碱催化作用，也能影响修饰反应。 5. 局部环境的极性 许多有机反应的速度与溶剂的极性有关。如疏水环境能阻止产物中电荷的分离反应，并能加速电荷中和的反应。也有的反应则与极性无关，如没有电荷分离的反应，介质的极性不重要。 §4