微生物限度检查法.ppt

微生物限度检查法 检查设施及环境 单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 沉降菌检查 环境要求 操作环境：洁净度10000级的局部洁净度100级的单向流空气区域或隔离系统，符合《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》，隔离系统按相关要求验证，内部环境符合无菌检查要求。 操作过程遵守无菌操作，防止微生物污染 检验量 一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）-制备供试液的量。 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为50cm2；化学膜剂为100cm2。 贵重、微量样品的检验量可以酌减。 要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加10g或10ml。 检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。 培养条件 除另有规定外， 细菌培养温度为30～35℃ 霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃ 控制菌培养温度为35～37℃ 稀释液与缓冲液 　pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 pH7.6无菌磷酸盐缓冲液 　０.９％无菌氯化钠溶液 　如需要，可在上述稀释剂灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。 培养基 微生物限度检查是建立在样品污染的微生物能在规定的培养基生长的基础上。因此，检查用的培养基质量是试验成功与否的关键因素。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。 培养基可按处方制备，亦可使用按处方生产的符合要求的脱水培养基。质量问题。 培养基 胆盐乳糖发酵培养基 取未灭菌的胆盐乳糖培养基1000ml ，加入0.04%溴甲酚紫指示液25ml。根据要求的用量分装于含倒管的试管中。灭菌。所用倒管的规格应保证产气结果的观察。 中试管，每管一般装10ml。双料乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外，其它成分加倍。 培养基 庖肉培养基 牛肉碎块的制备 新鲜牛肉，除去脂肪和筋腱，加水煮沸约10分钟，切成约5mm3的小块，称重，按1∶3（肉∶水）加蒸馏水，置4～10℃浸18～20小时后，煮沸1小时，用白布过滤（滤液即为1∶3牛肉浸液），肉渣用自来水漂洗2次，然后加入适量氢氧化钠液，搅拌，使pH在 8.4左右，浸泡过夜，次日倾去上层水，用蒸馏水冲洗2～3次，放在纱布上，自动沥干（不要挤压）。将肉渣铺在搪瓷盘上，灭菌，于80～100℃烘干，筛去碎屑，装瓶，保持干燥，备用。 庖肉培养基的制备 将上述碎肉块装入合适的容器中，再加入营养肉汤培养基，碎肉的量约为1.5%，调节pH使灭菌后为应为7.3±0.1。灭菌。 培养基 哥伦比亚琼脂培养基 除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化，滤过，分装，灭菌，冷至45～50℃，加入相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾注平皿。 培养基及稀释剂的灭菌 培养基及稀释剂配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。 培养基稀释剂配制后应尽快灭菌，避免微生物的繁殖。 一般采用湿热灭菌法，灭菌程序均应验证后方可采用。以防止采用不适当的加热和灭菌条件导致灭菌不彻底或培养基颜色及PH的变化、透明度及琼脂凝固力的降低等变化，导致培养基及稀释剂不符合质量要求。 培养基的贮藏 制备好的培养基应在2-25℃保存。 培养基的外部应进行适当的包裹，培养基容器的塞子和保藏的条件应使配制好的培养基最低限度的失去水分，并防止微生物的污染。 供试液 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 供试液的体积：100ml。 供试品分类 供试品分类 液体供试品 固体、半固体或黏稠液性供试品 需用特殊供试液制备方法的供试品 供试液制备 液体供试品 取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1∶10的供试液。 油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。 水溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。 供试液制备 固体、半固体或黏稠液性供试品 取供试品10g,，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓 冲液至100ml，用匀浆仪或其它适宜的方法， 混匀，作为1∶10的供试液。必要时加适量的 无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试 品分散均匀。 供试液制备 非水溶性供试品 取供试品5g(或5ml),加至含溶化的（温度不超过45℃）司盘80 5g、单硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯80 10g无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加