吡那地尔对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧缺糖损伤保护作用.pdf

维普资讯 第 24卷 第 3期 武汉大学学报 (医学版) Vo1．24．No．3 2003年 7月 MedicalJournalofWuhanUniversity Ju1．2003 吡那地尔对体外培养大鼠大脑皮层神经 细胞缺氧缺糖损伤的保护作用 王 华 麦根荣 陈宝芳 李 涛 王卫 民 潘 同国 杨 勇 谢集建 。武汉大学人民医院儿科 武汉 430060 湖北省十堰市太和医院 儿科 ，分子生物学实验室 十堰 442000 摘要 目的：探讨 ATP敏感性 K 通道 (K )开放剂吡那地尔 (pinacidil，Pin)对缺氧缺糖再复氧损伤大 鼠大脑皮 层神经细胞的保护作用。方法 ：体外培养大 鼠大脑皮层神经细胞，细胞培养至 10d，建立神经细胞缺氧缺糖损伤模 型，观察 Pin及 KATP阻断剂格列苯脲对缺氧缺糖不 同时间，再复氧 24h后细胞死亡率 、丙二醛 (MDA)含量 、超氧化 物歧化酶 (SOD)活力的影响 。结果 ：缺氧缺糖 、再复氧后大 鼠的神经细胞死亡率均显著升高、MDA生成增多、SOD的 活力下降 ，Pin干预后 ，细胞死亡率下降、MDA生成减少 、SOD的活力升高 ；格列苯脲能拮抗 Pin这种保护作用 。结 论 ：Pin对缺氧缺糖损伤神经细胞具有保护作用 ，并与拮抗氧 自由基有关 。 关键词 吡那地尔；格列苯脲 ；ATP敏感性 K 通道 ；细胞培养 中图分类号 R722．12 最近 的研究发现 ，ATP敏感性 K 通道 (ATPsen． 司)，胎牛血清 (杭州 四季青)，神经元特异性烯醇化 sitivepotassiumchannel，K^TP)也存在于神经元…，其 酶 (NSE)、SP9001试剂盒 、DAB试剂盒 (北京 中山)， 开放具有 明显 的神经保护作用 。既往 的研 究证 MDA、SOD检测试剂盒 (南京建成生物工程研究所)。 实 ，K开通道开放剂 的应用在抗高血压 、治疗心肌缺 1．2 方法 血等方面取得 显著疗 效 ，而对脑缺氧和 ／或脑缺血 时 1．2．1 大 鼠大脑皮层神经细胞 的原代培养 参照 氧化损伤的影响报道甚少。本实验通过体外培养大 Choi等 方法并加以改进 。新生大 鼠(0～1d)，75％ 鼠大脑皮层神经细胞 ，建立神经细胞缺氧缺糖损伤 酒精消毒 ，断头置冰上 ，无菌分离大 鼠大脑半球 ，剪 模型 ，从离体水 平 观察 K开通道 开放剂 吡那 地尔 碎 ，置 37℃ 水浴并用 0．25％胰酶消化 15min，血清 (pinacidil，Pin)及 K开通 道 阻 断剂 格 列苯 脲 (glib． 中止消化 ，1000r·min 离心 5min，弃上清 ，加入含 enclamide，Gli)对缺氧缺糖再复氧所致氧化损伤 的大 血清 的 DMEM培养基 (20％胎牛血清 +80％DMEM+ 鼠皮层神经细胞 的影 响 ，探 索该药治疗缺氧缺血性 100ttg·ml 谷氨酰胺 +青霉素 100U·ml～ +链霉素 脑损伤 的价值 。 100U·ml～，pH7．2～7．4)，用滴管反复吹打分散 ，过 200目滤网，滤液用血细胞计数板计数 ，调细胞浓度 1 材料与方法 为 1×10ml～，将调 整好浓 度 的细胞移 人预先用 1．1 材料 0．1％多聚赖氨酸处理过夜的 24孔培养板 中，37℃、 1．1．1 动物 出生 24h以内的 Wistar大 鼠，雌雄不 5％CO：培养箱 中培养 48h待细胞贴壁后 ，全量换 拘 ，由郧 阳医学 院动物 中心提供 。