2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

(1) (1) (2) (3) (4) (5) 植物体细胞杂交过程示意图 如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？ 动物细胞也能融合吗？ A细胞 B细胞 人工诱导 1.动物细胞融合的概念 杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个细胞的过程。 三、动物细胞融合 特点：融合后的细胞具有原来两个或者多个细胞的遗传信息的单核细胞。 举例： 两个正在融合的鸡血细胞 受精作用 诱导方法 动物细胞融合过程 电激 灭活的病毒 PEG 诱导方法 诱导方法 诱导方法 诱导方法 诱导方法 灭活丧失感染性， 保留融合活性。 原理： 融合后细胞的类型： A B 细胞膜的流动性 五种AA、AB、BB（A、B） 融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 融合原理 融合前处理 诱导融合的方法 主要用途 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合 胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合 1.3 比较动、植物细胞杂交技术 强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞。 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。 二、单克隆抗体 分化 效应B淋巴细胞 记忆B淋巴细胞 B淋巴细胞 抗体的传统生产方法： 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体 该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 单克隆抗体 四、单克隆抗体 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 1975年英国科学家米尔斯坦和科勒的实验 ★ 利用B淋巴细胞产生抗体的功能。 ★ 利用骨髓瘤细胞无限增殖的特性。 ★ 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞。 ★ 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）克隆化培养和抗体检测：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 小鼠 抗原 B淋巴细胞 骨髓细胞 骨髓瘤细胞 动物细胞培养（50代后） 融合 杂交细胞 一选：选择培养基 杂交瘤细胞 动物细胞培养 大量杂交瘤细胞 二选：抗原--抗体杂交 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 体外：培养基 体内：小鼠腹腔内 单克隆抗体的制备过程 1、注射抗原的目的是什么？ 2、诱导其融合的方法有哪些？ 3、融合后培养液中有几种细胞？ 4、第一次筛选的方法和目的 5、第二次筛选的方法和目的 6、杂交瘤细胞有什么特点？ 7、本过程利用了哪些技术？ 单克隆抗体制备过程示意图 单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 单克隆抗体的制备原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。 单克隆抗体的优点： 特异性强、灵敏度高、可大量制备 2.3单克隆抗体的应用 1、诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 单抗导向，药物为弹头 2、治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。 两个过程 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 －－灭活病毒 一个新细胞－－杂交瘤细胞 一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 小结：动物细胞融合过程 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 筛选杂交细胞AB 有丝分裂 注意： 动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。 小结：单克隆抗体的制备过程 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细