临床基因扩增检验质量保证新版讲课.ppt

2、PT评分 所有质评样本的测定结果与预期结果的符合率达到80％ 以上时，判为合格，否则不合格。 计算公式为： (某项目测定结果可接受样本数／某项目样本总)×100= 本次某项目测定得分； 如评价多个项目则本次质评得分计算公式为： (所有项目测定结果可接受样本总数／所有项目样本总 数) ×100=本次测定得分。 3、年终综合成绩评价 按PT评分计分。年回报率为100%， PT≥90%为优秀，80%≤PT＜90%为良好。 （一）能力验证/室间质量评价主要问题及原因分析 HBV-DNA、HCV-RNA定量检测 目前最为重要的检测项目 样品编号 指定值 总实验室数 及格实验室数 不及格实验室数 及格率% 1313 3.701±0.5 134 122 11 91.0 1315 4.540±0.5 134 123 10 91.8 1411 6.670±0.5 141 129 12 91.5 1415 3.410±0.5 141 127 14 90.1 1421 3.620±0.5 139 132 7 95.0 样品编号 指定值 总实验室数 及格实验室数 不及格实验室数 及格率% 1314 6.080±0.5 42 32 10 76.2 1415 4.830±0.5 45 35 10 77.8 1422 3.890±0.5 48 41 7 85.4 1423 6.670±0.5 48 42 5 87.5 1424 6.130±0.5 48 43 7 89.6 1、根据能力验证结果看： （1）HBV DNA：及格率均大于90%，较为理想。 （2）HCV RNA：及格率介于75-95%间，不理想。 （3）样本浓度高低与检出及格率之间没有明显关系。 2、 图3、图4、图5、图6显示： HBV DNA：靶值（生产厂家提供）与各试剂组指定值非常接近。 HCV RNA：不同试剂组间指定值差异较大 。 匹基组指定值比靶值↑ ↑ ；科华组： ↓ ↓、接近或↑ ↑ ；达安组 相近。 说明试剂本身的校准品与靶值存在偏倚 （现在几乎所有的试剂盒均采用国际单位（IU/ml）来进行定量表达，即所有试剂的校准品均与国际 标准溯源）。 试剂与靶值的偏倚的原因： 1、可能是由试剂本身标准曲线的偏差引起的。 试剂使用的实验室越多，相关性曲线的可靠性越大，否 则亦然。 2、可能与个别实验室检测结果、保存条件有关。 如：试剂在不同操作者间变异较大等。 3、假阳性产生的原因： 依照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》中“各区独立， 注意风向、因地制宜、方便工作”原则 分区设计和工作，可避免:扩增产 物的污染和提取过程中标本的交叉污染。 分区设计不合理；实验室无质量保证体系；人员未经规范化培 训；自配试剂及无SOP；室内质量控制未开展；能力验证或实验室 间比对未参加。 4、假阴性是目前HCV-RNA检测中比较突出的问题。 国内：DNA（经典方法：酚-绿仿抽提法）； RNA（除此外，胍盐提取结合酚-绿仿抽提法）。 国外：旋转离心柱提取法、磁珠法（纯度更高且已实现自动化提取） 原因一： PCR扩增仪不准确；煮沸裂解法，核酸提取纯度低；PCR反应 抑制物难去除；样本加样量少、核酸提取量低、降低了检测的灵敏 度。 改进方法