第九章核酸提取和鉴定.pptVIP

第九章 核酸的提取与鉴定 第一节　核酸提取 一、质粒DNA的提取 第二节　核酸凝胶电泳 第三节　DNA测序 一、Sanger双脱氧链终止法 二、Maxam-Gilbert化学降解法 三、DNA测序自动化 0.2~3 1.5 0.1~2 2.0 0.4~6 1.2 0.5~7 0.9 0.8~10 0.7 1~20 0.6 5~60 0.3 分离DNA的有效范围(Kb) 琼脂糖凝胶浓度(%) 琼脂糖凝胶浓度与分离DNA的有效范围 ⑴加缓冲液 ⑵加热：90度左右 ⒉制胶 ⑶灌胶，插入梳子（冷却40-45度后凝固 ）； ⑷将凝胶置于电泳槽中； ⑸加入电泳缓冲液，拔出梳子 ⒊上样：样品与上样缓冲液混合，加入胶孔中； ⒋接通电源，进行电泳； 上样缓冲液的作用 （监测电泳的进程；增加样品密度） 溴酚蓝 (200bp) 二甲苯青 (1600bp) 1.4%琼脂糖凝胶 ⒌染色： 溴化乙锭：一种荧光染料， 和双链DNA结 合后，在紫外 光照射下发橙 黄色荧光； ⒍检测：紫外透射仪、凝胶呈像分析系统 凝胶电泳的应用 ⒈核酸分