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微生物学通报 JAN 20, 2012, 39(1): 125−137
Microbiology China © 2012 by Institute of Microbiology, CAS
tongbao@
生物实验室
尼罗红染色法筛选产油酵母及定量检测胞内
油脂含量的研究
1,2 1* 1 1 1
林义 钟添华 骆祝华 黄翔玲 叶德赞
(1. 国家海洋局第三海洋研究所 福建 厦门 361005)
(2. 厦门大学 生命科学学院 福建 厦门 361005)
摘 要: 【目的】建立产油酵母筛选以及胞内油脂含量测定的简便方法。【方法】利用尼
罗红与胞内油脂成分结合后在紫外光照射下发出荧光且荧光强弱与油脂含量相关的原
理。通过在添加尼罗红的培养基中培养酵母, 并观察菌落荧光的方法对385 株深海酵母进
行产油脂菌株筛选, 利用26S rDNA D1/D2 区序列分析方法对筛选获得的产油酵母菌株进
行鉴定, 并以其中的一株高产油脂酵母(2A00015)为试验菌株, 建立了一套尼罗红染色快
速测定油脂含量的方法。【结果】获得22 株产油酵母, 其中油脂含量最高可达62.9%, 经
分子鉴定后显示这 22 株酵母分别属于(Candida viswanathii) 、近平滑假丝酵母(Candida
parapsilosis ) 、粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa) 、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces
hansenii) 、季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii) 以及Rhodosporidium paludigenum 酵母。
尼罗红染色快速测定油脂含量方法的最佳检测条件为: 菌悬液 OD600 小于 1.2, 尼罗红浓
度0.5 mg/L, 染色时间5 min, 激发波长488 nm, 发射波长 570 nm。该测定方法得到相对
荧光强度与称重法得到油脂含量呈正相关性, R2=0.9637 。
关键词: 尼罗红染色法, 产油酵母, 26S rDNA D1/D2, 荧光, 油脂含量
Study on screening of oleaginous yeast and determination of
intracellular lipid content by nile red dyeing
LIN Yi1,2 ZHONG Tian-Hua1* LUO Zhu-Hua1 HUANG Xiang-Ling1 YE De-Zan1
基金项目：国家海洋局第三海洋研究所基本科研业务费专项资金项目(No. 海三科 2010009)
*通讯作者：Tel: 86-592-2195679; : zth23-1980@163.com
收稿日期：2011-07-05; 接受日期：2011-10-09
126 微生物学通报 2012, Vol.39, No.1
(1. Third Institute of Oceanography, State Oceanic Administration, Xiamen, Fujian 361005, China)
(2. School of Life Sciences, Xiamen Uni
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