多头带绦虫Tm7基因的表达及间接ELISA检测方法的建立.pdf

多头带绦虫Tm7基因的表达及间接ELISA 检测方法的建立 安晓雪1，杨光友1王颖旺1，牟静1， 阳爱国3古小彬1， 杨应东2，韦雷飞2，文建国2，王淑贤1，边尧4 1.四川农业大学动物医学院，雅安 625014;2.四川省攀枝花市农林科学研究院畜牧水产所，攀枝花 617061; 3.四川省动物疫病预防控制中心，成都 610041;4.四川省雅安市雨城区畜牧局，雅安 625000 摘要:以多头带绦虫Tm7重组蛋白为抗原，建立动物多头蚴病早期诊断方法。本研究从羊脑多头蚴原头节提取 总RNA，采用RT-PCR技术首次扩增出Tm7基因的全序列，该基因的开放阅读框为207bp，编码68个氨基酸。将 此基因克隆到pET-32a(+)载体，构建重组表达质粒pET-32a-Tm7，经转化大肠杆菌BL21(DE3)后IPTG诱导表 达，用SDS和Westernblot检测表达产物。以纯化后的表达蛋白作为抗原，建立检测羊脑多头蚴病抗体的 重组蛋白间接ELISA方法。研究结果表明，Tm7基因在大肠杆菌中成功表达，表达产物为约27ku的融合表达蛋 白，该蛋白能识别羊脑多头蚴病阳性血清。建立的间接ELISA方法，检测敏感性可达93.3％，特异性达94.1％，研 究结果表明Tm7重组蛋白可作为脑多头蚴病的诊断抗原。 脑多头蚴;重组抗原;Tm7;间接ELISA S852.734 A 0366-6964(2011)09-1302-07 ProkaryoticExpressionofTm7GeneofTaeniamulticepsandEstablishmentofIndirect ELISAUsingtheExpressedProtein ANXiao-xueYANGGuang-you WANGYing-wangMUJing YANGAi-guoGUXiao-binYANGYing-dong,WEILei-fei, WENJian-guo,WANGShu-xian,BIANYao 2011-01-26 教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRTO848) 安晓雪(1984-)，女，四川成都人，硕士，从事动物寄生虫病学研究，E-mail:cake1220@126.com T4连接酶 (AF481884)和EF-han6 图4 Tm7蛋白表 Fig.4 TheSDS BL21(DE 多头蚴病的血清、5份 @@[1] IBECHUKWUBI,ONWUKEMEKE.Intraocular coenurosis:acasereport[J]. BrJOphthalmol, 1991,75(7):430-431. @@[2] EL-ONJ,SHELEFI,CAGNANOE,etal.Taenia multiceps:ararehumancestodeinfectioninIsrael [J].VetItal,2008,44(4):621-631. @@[3] CHRISTODOULOPOULOSG. Tworareclinical manifestationsofcoenurosisinsheep[J].VetParasi tol,2007,143(3-4):368-370. @@[4]张西臣，胡力生.羊脑多头蚴病ELISA试验用抗原 制备的初步研究[J].兽医大学学报，1986，6(4):404- 411. @@[5]剡根强，吴元昌，包亚芳，等.用间接血凝试验检测绵 羊脑多头蚴病抗体的试验[J].中国兽医科技，1997， 27(12):27-28. @@[6]王春仁，于万才，仇建华，等.斑点免疫金渗滤试验检 测绵羊脑多头蚴病的研究 [J].中国兽医寄生虫病， 2001,9(1):12-14. @@[7]姚新华，苑淑贤，周维，等.斑点免疫吸附试验诊断 羊脑多头蚴病的研究[J].吉林畜牧兽医，2001(12): 3-5. @@[8]吴国华，郑亚东，贾万忠，等.基于重组猪囊