聚合酶链式反应-2011分子生物学.pptVIP

第三章 聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction, PCR） 聚合酶链反应 又称体外DNA扩增技术。是指利用耐热DNA聚合酶的反复作用，通过变性-退火-延伸循环操作，在体外特异地扩增所需要的DNA片段的一种技术。它能快速将皮克(pg)水平的DNA特异地扩增100万倍左右，达到微克(?g)水平。 优点：敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等。 在分子生物学、基因工程研究，以及遗传病、传染病和恶性肿瘤等基因诊断和研究中得到广泛应用。 并已普及到许多普通实验室，大大简化了传统的分子克隆技术，便于对目的基因进行分析、鉴定。 通常的DNA 扩增法是分子克隆法, 首先要构建含有目的的基因的载体, 然后将它导入细胞后进行扩增,还要用同位索探针进行筛选;要经过DNA内切、连接、转化和培养等相关的过程，操作复杂,一般需要数周时间。 PCR技术的发现 70年代的初期由Dr. H. Klenow发现了较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli ； 1976年从 温泉中的细菌（Thermus aquaticus）分离出来的Taq polymerase ，它的特性能耐高温。 80年代之后它被广泛运用； 1983年美国Mullis等人发明了聚合酶链反应方法； 1985年美国PE-Cetus公司开发