近江牡蛎鳃细胞地原代培养.PDF

近江牡蛎鳃细胞的原代培养 王 彬, 张其中 ( , , , 510632) 摘要: 采用改良的DMEM(HG)培养基, 建立了近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)鳃细胞体外培养技 术, 包括鳃组织块培养法和胰酶消化培养法。结果表明, 组织块培养法接种6 h 后, 细胞开始从组织块 中迁出, 细胞形态较小, 呈圆形、椭圆形或多边形, 直径3 ～6 μm 。培养至3 d 时, 细胞在组织块周围 形成生长晕。培养至6 d 时可进行细胞传代, 本次实验细胞已传至第6 代。胰酶消化法接种约2 h 后, 细 胞逐渐贴壁, 从形态上主要分为两类, 一类为小型细胞, 形态为圆形、椭圆形或多边形, 直径3 ～6 μm, 数量多, 增殖速度较快; 另一类为大型细胞, 形态为圆形、椭圆形或多边形, 直径 10 ～20 μm, 部分细 胞内部含有颗粒, 数量较少, 增殖速度较慢。培养至2 d 时可进行细胞传代, 传代培养物中的优势细胞 皆为小型细胞。本次实验细胞已传至第6 代。 关键词: 近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis); 鳃细胞; 组织块培养; 胰酶消化 中图分类号: Q813.1 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2010)06-0001-05 (Crassostrea hongkongensis) 1 材料和方法 , , 1.1 实验动物 , , , , , , (8.0±2.0)cm, [1] (3.0±1.0)cm, (150±25)g HSC70 2~4 , , [2,3] , 1.2 药品和试剂 (), , ( (), ( , ), ), ( ), DMEM(GIBCO), FBS( 20 Harrison Carrel ) , 1.3 试验仪器 [4], ,