生命科学学院生物科学专业本科毕业答辩《小鼠卵巢结构的冰冻切片观察》剖析.pptVIP

小鼠卵巢结构的冰冻切片观察 姓 名: 专 业：生物科学 指导教师： 背景 卵巢作为雌性的生殖器官，具有生殖和内分泌功能。随着越来越多生殖问题的出现，对于卵巢的研究备受重视。小鼠由于自身的特殊性广泛用于生物学实验。 目的 1. 观察卵巢显微结构，识别各类卵泡结构。 2. 熟练掌握冰冻切片和HE染色法技术要领，体会影响 切片质量的各种因素。 3. 对比石蜡切片，选择最佳切片方法。 背景与目的 实验材料与方法 实验材料：3-4周龄KM系正常雌性小鼠2只； 生理盐水、各级乙醇、苏木素染液、伊红染液、 OCT、1×APE、1×PBS、强酸洗液、丙酮、二甲苯、 中性树脂等。 试验方法 ： 1.制备载玻片 2.取材 3.液氮速冻 4.冰冻切片 5.HE染色 6.封片观察 实验结果 在HE染色的作用下，显微镜下观察到细胞核被苏木精染成蓝色，细胞质被伊红染成粉红色。 图1. 3周龄小鼠卵巢（10×） 图3. 4周龄小鼠卵巢（40 × ） 箭头所指为初级卵泡 图2. 3周龄小鼠卵巢（40 × ） 箭头所指为原始卵泡 图5. 4周龄小鼠卵巢（ 40× ） 箭头所指为黄体 图4. 4周龄小鼠卵巢（ 40× ） 箭头所指为次级卵泡 结果分析 切片质量 1.从完整性上看，部分切片边缘不完整，中间出现缺损。 原因①温度变化； ②卵巢自身特点； ③切片刀和防卷板不整洁； ④组织固定不充分,冲洗脱片。 2.从染色上看，所用伊红染液为醇溶性的，在之后的乙醇脱水 时，可使染色变浅。 结论 冰冻切片快速﹑简便，能够较好地保存各种抗原和酶的活性。但也有局限性，例如切片较厚，不易做连续接片，切取组织块不宜太大等。 对于卵巢观察而言，由于成熟卵泡的空腔中充满卵泡液，容易产生冰晶，所以卵巢的冰冻切片效果并没有石蜡切片的好。但在快速病理诊断中还是冰冻切片可行性好。 * *