浙江省猪链球菌血清及分子流行病学调查.pdfVIP

目 录 摘 要 ……，…… 1 A B S T R A C T … … ，… … 3 前 言 ……、……5 第 一 部 分 文 献 综 述 ……7 第一章 猪链球 菌 2 型主 要毒力 因子研 究进展 ……8 1、荚膜 多糖 (C P S) ……8 2 、溶菌 酶释 放 蛋 白 (M R P ) 一……9 3 、细胞 外 蛋 自因 子 (E F ) 与细 胞 外 蛋 白因子类似 物 (E F* ) ……10 4 、溶血 素 (SL Y ) ……，… …，……11 5 、未 知 蛋 自质 片段 ..…，…… ~二~..一……12 6 、粘 附素 ……12 7 、lgG 结合 蛋 自……13 8 、 O R F Z 一 ……~ ..…… 13 9 、谷氨 酸 脱氢 酶 (G D H ) ……，……，……14 10 、纤连 蛋 自 (F ibroneetin ，Fn ) 和 血纤 蛋 白原 (F ibrinogen ，F ， ) 的结合 蛋 白 (FB P S ) ……14 11、不 断发现 中 的新 的毒 力 因子 …… “……14 第 二 章 猪链 球 菌 分 子 生物 学分 型研 究进 展 …… 16 1.M L ST 方 法 : ……，……16 2 .R A PD 分 型 : ……，一..……17 3. 核糖体 分 型 : ……17 4.AF L P 分型 : ……，……18 5.P F G E 方 法 : ……，… …18 6. 国 内猪链 球 菌 分 型研 究现 状 : ……19 第 二部 分 实 验 研 究 ……，……20 第 一 章 猪链 球 菌 E LISA 诊 断方法 建立 及 血清 流行病 学调 查 ……21 1. 材 料 与 方 法 ……，……21 l，l 材 料 ……2 1 1.1.1 菌种 、载 体及 血清 ……2 1 1.1.2 主 要试 剂 ……，……，……2 1 1.2 方 法 ……2 1 1.2 .1 引物 设计 与合 成 ……2 1 1.2 .2 细 菌 D N A 的提 取 一...…… ‘一……22 1.2 .3 P C R 扩 增 SA O 与 M RP 基 因 一……~……22 1.2.4 P C R 产 物 的克 隆 ……23 1.24 .1P C R 产 物 的纯 化 ……，… …，……23 1.2.4 .2 P C R 产 物 的克 隆 一……，……，.23 1.2.5 重 组 质粒 在 大肠 杆 菌 中的表 达 ……24 重组 菌 的 诱导表达 …… ，……24 重 组 蛋 自可溶 性 分析 ……，……，.25 1.2 .6 重 组 蛋 白的纯 化 ……，……，一……26 1 2 .6 ，1 蛋 白过 柱 纯 化 、二、…、.、二、.、…、、… 、..……，…… ，，、、..…… ， ……26 1.2 .6 .2 B r adfor d 法 测 定 土 白浓度 ……，……27 1.2 .7 W estem 一b l以 分 析 重组 蛋 白反应 原性 ……户……27 1.2.8 E L ISA 检测 方 法 的建 众，..…，……28 1.2 .9 浙 江 省猪 链 球 菌 血 清 流 行病 学 调 查 ……28 2 . 结 果 ……，……，……28 2.1P C R 扩 增 SA O 及 M R P 基 因 ……28 2 .2 重 组 质粒 的鉴 定 ..…，……，..…，……29 2 .2 .1 重 组 质 粒 的 PC R 鉴 定 ……，……29 2 .2 .2 重 组 质