茶树鲜叶抗坏血酸过氧化物酶活性的变化规律及测定方法.pdfVIP

第29卷第5期 热带作物学报 V01．29No．5 CHINESE OFTROPICALCROPS Oct．2008 2008年10月 JOURNAL 茶树鲜叶抗坏血酸过氧化物酶活性 的变化规律及测定方法 孙 云1，2 江春柳1·2 赖钟雄1p邵巍1 王秀英1．2 1福建农林大学园艺植物生物工程研究所福州 350002 2福建农林大学园艺学院福州 350002 摘 要探讨茶树鲜叶抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的测定条件，分析不同茶树品种以及茶树鲜叶不同叶位 APX活性的变化。结果表明：聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)加入量约为鲜叶重的1．5倍，酶提取液pH为7．8，反应液 pH为7．O，抗坏血酸(AsA)浓度为O．50mmol／I。时茶树鲜叶APX活性最高；茶树鲜叶APX活性随冷藏时间的延长 呈下降趋势；福建7个主要茶树品种以福鼎大白茶的APX活性最高，铁观音的APX活性最低；茶树鲜叶不同叶 位APx活性变化趋势为：芽第一叶第二叶第三叶老叶嫩茎。 关键词 茶树 鲜叶抗坏血酸过氧化物酶(APx)酶活性 测定方法 中图分类号S571．1 抗坏血酸过氧化物酶(APX)也称维生素C过氧化物酶，是植物细胞中防御外界氧化胁迫和植物本身活 性氧代谢的重要抗氧化酶类，在降低H：O：对植物细胞产生氧化损伤方面起关键作用。要使APX发挥正常的 含量高，种类多，饮用绿茶对人体补充A8A的作用很大，但AsA在茶叶加工和储存过程中容易大量损失。 影响，建立了茶叶APX活性的测定方法，并利用此方法分析了冷藏条件下以及不同茶树品种、鲜叶不同 叶位APX活性的变化规律。 1材料与方法 ，’ 1．1材料和仪器 试验材料：福鼎大白茶、福云6号、黄旦、本山、毛蟹、肉桂、铁观音，采自福建农林大学茶园。 试验仪器：台式高速冷冻离心机、T6新世纪紫外可见分光光度计等。 1．2试验方法 APX活性的测定参照文献[5]的方法并加以改进。 mL 12l酶液的制备称取O．5g的茶树鲜叶剪碎，加入适量的石英砂、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)和7．5 酶提取液，在冰浴中充分研磨，离心(10000槽、4℃、20IIlin)取上层清液1mL，分装于小离心管中置于 4℃备用或一20℃保存。 1．2．2 APX活性的测定提取液：50 mmo此 mmoⅥ。PBS(磷酸氢二钾一磷酸二氢钾缓冲溶液)，pH7．8；2 mmol／L mmol，L AsA；5 EDTA。反应液：50 AsA；0．1mmol几EDTA。 mmol几PBS，pH7．O；0．5 福建省果茶蓐大科技专项(编号：2004Nz—02—3)资助。 孙云 女，1964年生，副教授，研究方向：茶叶加工与生物技术。E—mail：8¨”nll25@126．com。 +通讯作者赖钟雄．E一眦il：laiaol@163．com。 收稿日期：2008—04-02修l旦I门期：2008．08-08 万方数据 5期 孙 云等：茶树鲜叶抗坏血酸过氧化物酶活性的变化规律及测定方法 563 在3个比色皿中各加入20斗L鲜叶APX粗酶液，再加入3mL反应液；l号比色皿中不加AsA和H20： 作为参照；2号比色皿中不加H：O：作为控制参照；3号比色皿中加入O．1mmol，LH20：启动反应；每10s连 续记录室温下290 nm吸光值的变化X。室温下每一分钟氧化1斗molAsA的酶量作为一个酶活性单位