玉米幼胚再生体系的建立及抗虫bt-s1m基因转化玉米的初探.pdfVIP

玉米幼胚再生体系的建立及抗虫 bt-s1m 基因转化玉米的初探 摘 要 玉米是重要的粮食、饲料及经济作物，建立高效、稳定的遗传转化体系对玉米种质资源的改良 具有十分重要的意义，而良好的受体及植株再生体系是遗传转化的前提。本研究以自交系 A188 、综 31、B73 及 Mol7 的幼胚为外植体，系统研究了玉米幼胚组织培养体系和农杆菌遗传转化体系的影响 因素，并将抗虫基因bt-s1m 转入玉米中，获得了转基因植株。主要研究结论如下： 1. 幼胚组织培养体系的建立研究发现：A188 、综 31、Mol7 的胚性愈伤组织诱导率较高、植株 再生能力较强，适宜作转化受体，且 NB 培养基较适宜作 A188 、综 31、Mol7 的诱导培养基，MB 较适合 B73 的愈伤组织诱导。雌穗授粉后 9-12 d，取长度为 1.0-2.0 mm 的幼胚作为外植体，在诱导 培养基中添加 2.0-3.0 mg/L 2,4-D ，参试材料的愈伤组织不仅得率最高，并且多为胚性愈伤组织。在 诱导期间，AgNO3 采用隔代添加法有利于提高胚性愈伤组织的诱导率，其最佳浓度为 10.0 mg/L 。0.25 mg/L 烯效唑对胚芽发生的抑制作用达到极显著水平，对胚性愈伤组织诱导率没有显著影响。2,4-D 浓度在第三次继代减低到 1.0 mg/L 时，对愈伤组织胚性的维持和芽状结构的形成有促进作用。蔗糖 浓度为 50.0 g/L ，6-BA 为 0.5 mg/L 时愈伤组织分化率最高且有利于苗的分化。IBA 浓度在 0.6 mg/L 时，再生苗生根效果较好。 2. 在前人的研究基础上，对影响农杆菌介导玉米转化的各种因素进行了优化，建立了以自交系 A188 、综 31、Mo17 以及A188 杂交幼胚为转化受体的遗传转化体系。研究结果表明：1.0-2.0 mm 的 幼胚是最适宜的转化受体，在感染液和共培养基中加入 100 μmol/L 乙酰丁香酮时抗性愈伤组织诱导 率最高；适合的菌液浓度为 OD600 ＝0.5，侵染时间为 10 min ，共培养时间为 3 d ；感染前将幼胚在 侵染液中浸泡 2-4 h 均有利于提高 T-DNA 转移效率。采用这个转化体系，通过 PCR 初步检测，共 得到抗虫转基因植株 32 株，其中 A188 16 株、综 31 14 株、Mo17 4 株、B73 ×A188 5 株、综 31 ×A188 2 株、Mo17 ×A188 1 株。PCR 阳性植株率为 0.588-4.160 ％。通过ELISA 检查 bt-s1m 占 可溶性蛋白的比例，最高达0.030%，是对照组的 11.795 倍。本研究初步建立了农杆菌介导玉米遗传 转化体系，为进一步将有用价值的基因转入玉米自交系中奠定了基础。 关键词：玉米幼胚；植株再生；根癌农杆菌；遗传转化 III Establishment of the Regeneration System of Immature Embryos in Maize(Zea mays L.)and the Genetic Transformation of Insect Bt-s1m Gene Abstract Maize (Zea mays L.)is an important cereal, forage and economic crop in the world today. It has very important significance for establishment of efficient, stable genetic transformation system of maize germplasm improvements and good receptor and plantlet regeneration system is the prerequisite of genetic transformation. In this