分子生物技术.pptx

分子生物技术在生理学中的应用;细胞复苏和传代的基本过程;4、待细胞长至致密单层时移去培养基，用PBS清洗细胞2次，加入37℃预热的0.25% 胰蛋白酶2mL消化3min左右。显微镜下观察到细胞逐渐变圆但尚未离壁时，吸走胰酶。 5、加入约2mL DMEM完全培养基吹打使细胞悬浮，室温下1100rpm离心5min，弃上清。细胞沉淀中加入DMEM完全培养基，按5×105个细胞/mL的密度接种于培养瓶中，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。 ;细胞划痕实验的基本过程;transwell实验的基本过程; 采用TRIzol试剂（Invitrogen）提取细胞总RNA，取1.0g RNA样品，采用SuperScript First-Strand Synthesis kit (Invitrogen) 试剂盒合成cDNA。采用SYBR Green PCR master mix试剂和ABI 7500 Fast Real-Time PCR System仪器进行定量PCR检测。采用ΔCt值的方法对各个样品中基因表达水平进行相对定量。引物由上海捷瑞公司合成。 ;（1）提取总RNA ① 细胞分组处理后，每孔加入1ml Trizol，混匀，使细胞充分裂解后，移入1.5ml 无RNase离心管中，室温静置3-5min； ② 加200μl氯仿，充分混匀，室温静置2 min； ③ 将离心管于4