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1、成熟胚培养 ◆ 培养条件和操作技术相对简单 ◆ 实质：胚的离体萌发生长（解除种皮的抑制作用） ◆ 适用：珍稀种子的萌发及某些难繁殖植物的抢救 A. 种子表面消毒后，在无菌条件下剥离出胚，接种于MS或MS+生长激素+(GA) B. 培养基：White；Tukey；Randoiph 无机盐＋糖(1-2%)＋生长辅助物质(激素、AA、活性炭、维生素等) ◆ 成熟胚培养方法与条件 2、幼胚培养（未发育成熟的胚培养） A.种子表面消毒后，在无菌条件和高倍解剖镜下切取完整胚，然后接种。 B.培养基：White；Rangwang；MS；B5；Nitsch 无机盐＋糖(3-5%)＋生长辅助物质(维生素、AA、椰乳等) ◆ 幼胚培养 ◆幼胚培养的关键技术 ◆ 取材的发育时期（越早越难培养） ◆ 幼胚剥离（成功与否的关键） ◆ 接种培养（条件控制：培养基、光照、温度等） ◆幼胚培养的生长方式 A. pH值：5.2-6.3，与植物有关。 B. 温度：多数胚25℃，有的需变温或较低较高温度。 C. 光照：通常弱光培养。光暗交替对幼胚生长有利，光照不利于胚根生长。 D. 幼胚需高无机盐、高AA、高蔗糖、高渗透压。 E. 液体培养基利于幼胚培养，固体培养基利于成熟胚培养。 ◆影响幼胚培养的因素： 3、胚培养的意义 ◆ 克服远缘杂交中杂种胚的早期夭折 ◆ 成熟胚培养快速繁殖 ◆ 培养物作为转基因受体材料 ◆ 理论研究领域（器官发生、胚乳的作用、胚胎切割？） 二、胚珠培养ovule culture of plants 未受精胚珠 受精胚珠 愈伤组织 发育成种子 大孢子或卵分化为单倍体植株 再生植株 ◆胚珠培养步骤 适宜时间摘取子房 70%酒精表面消毒30S 5%次氯酸钠液中灭菌10分钟 无菌水冲洗数次 无菌条件下取出胚珠 接种于固体培养基 　　培　　养 基本培养基： MS；Nistch ；White 三、子房培养ovary culture of plants ◆ 授粉前 ◆ 授粉后 得了单倍体植株。 ◆子房培养步骤 ◆ 摘取时间：在开花前1－5天摘下未授粉子房；或授粉后摘下子房。 ◆ 灭菌：禾谷类植物用70%酒精擦洗幼穗；双子叶植物花蕾用饱和漂白粉灭菌15分；子房用70%浸30秒，无菌水冲洗后，用0.1%升汞15－20分。再无菌水冲洗，无菌滤纸吸干。 ◆ 接种：无菌条件下剥开幼花，夹出子房并接种于培养基（MS、N6等）。 ◆ 培养：T26℃,RH50-60%，16h散射光。 1、材料的选择 主要考虑两个方面的问题： （1）品种间的差异（与植物基因型关系密切） （2）胚囊发育时期（对胚状体诱导频率起关键作用） 2、培养基 3、接种方式 主要应考虑两方面的问题： （1）极性 （2）营养吸收 4、单倍体的来源和发育途径 ◆ 由未授粉子房培养产生的单倍体植株来源和发育途径多种多样 授粉后胚珠子房培养的再生植株倍性如何？ 三、被子植物胚乳培养endosperm culture of plants 1、植物胚乳的发育特性 ◆ 被子植物胚乳（3n） ◆ 裸子植物胚乳（n） 胚乳培养的再生植株倍性如何？ 倍性混乱：除三倍体、多倍体外，多数看来是由多种倍性细胞所组成的嵌合体！ 可能胚乳培养具有更广泛的变异性！ 胚乳的类型（按发育初期是否形成细胞壁） ◆ 胚乳培养过程 胚乳 胚状体发育成苗 不定芽苗 柚，柑桔和枣 大麦, 水稻, 玉米, 苹果, 马铃薯 愈伤组织 形态发生 2、影响胚乳培养的因素 处于细胞形成期并保持旺盛的分生能力时易成功！ 旺盛期的未成熟胚乳，在诱导培养基上无需原位胚的参与，就能形成愈伤组织。 完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前，必须借助于原位胚的萌发，使其活化。 胚在萌发时产生某种物质“ 胚因子”。外源GA3能部分取代胚因子。 3、胚乳培养的意义 ◆ 研究胚乳细胞的全能性 ◆ 离体条件下研究胚和胚乳的关系 ◆ 三倍体育种 ◆ 胚乳再生植株的染色体倍性变异 很少三倍体(稳定型)，大多为二倍体，非整倍体(畸变型)。 WHY？ 畸变型胚乳类型：多倍性细胞嵌合体，核型胚乳 核型胚乳：被子植物中最普遍的胚乳发育形式。初生胚乳核第一次分裂和以后的多次分裂不伴随细胞壁的形成，胚乳核游离在胚囊中。 细胞型胚乳：从初生胚乳核分裂开始，产生细胞壁，形成胚乳细胞。 ◆原因: 胚乳愈伤发生的部位：不同部位胚乳细胞染色体组成不同。 培养基中外源激素的种类和水平： 继代培养时间长短： 植物如何阻止多精入卵？ 短片：植物的双受精 A. 自然条件下小孢子的第二次分裂及萌发形成的花粉管; B. 营养核重复分裂而生殖核败育; C. 生殖核重复分裂而营养核败育; D. 两个核共同分裂形成单倍体胚; E. 两个核融合后分裂形