化学发光免疫技术.ppt

1.分离方法 常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被磁颗粒，与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或 抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过在磁场 中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物 进行分离的技术。 二、方法类型 2.常用的免疫学反应模式 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 双抗体夹心法 三、技术要点 抗原抗体结合反应 结合物与游离物的分离 (磁颗粒分离技术) 化学发光反应 化学发光酶免疫分析（CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗体(抗原)发生免疫反应后，经洗涤将结合物与游离的酶标物分离后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。 第三节 化学发光酶免疫分析 一、 检测原理 碱性磷酸酶化学发光酶免疫分析双抗体夹心法原理示意图 1.根据标记酶不同分类 可分为辣根过氧化物酶标记的化学发光酶免疫分析和碱性磷酸酶标记的化学发光酶免疫分析。前者常以鲁米诺或其衍生物作为发光底物，后者常以AMPPD作为发光底物。 2. 根据免疫学反应模式分类 同化学发光免疫分析，主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法等主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是酶而不是直接标记发光剂。 二、方法类型 三、技术要点 抗原抗体结合反应 结合物与游离物的分离 （磁颗粒分离法 、微粒子捕获法 、包被聚苯乙烯反应珠或孔分离法 ） 酶促发光反应 电化学发光免疫分析（ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，通过抗原抗体反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的抗原或抗体进行定量分析，它包括电化学和化学发光两个过程。 第四节 电化学发光免疫分析 一、 检测原理 电化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图 电化学发光免疫测定示意图 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 其反应模式同发光免疫分析，主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法三种主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是三联吡啶钌。 二、方法类型 三、技术要点 抗原抗体反应 结合物与游离物的分离 (磁颗粒分离技术) 电化学发光过程 第五节 化学发光免疫技术的临床应用 一、化学发光免疫技术的特点 1.敏感度高，甚至超过RIA； 2.精密度和准确性均可与RIA相比； 3.试剂稳定，无毒害； 4.测定耗时短； 5.测定项目多； 6.已发展成自动化测定系统。 1.甲状腺激素 T3、T4、hTSH、FT4、FT3、抗TPO、甲状腺球蛋白、抗甲状腺球蛋白抗体等。 2.生殖激素 β-HCG、催乳素、促卵泡激素、促黄 体激素、孕酮、雌二醇、非结合雌三醇、甲胎蛋白、睾丸酮、硫酸脱氢异雄酮。 3.肾上腺/垂体激素 皮质醇、尿皮质醇、人生长激 素、甲状旁腺素、促肾上腺皮质激素。 二、 化学发光免疫技术常见的检测项目 4.贫血因子 维生素B12、叶酸、红细胞叶酸、铁蛋 白等。 5.肿瘤标记物 AFP、CEA、PSA、游离PSA、CAl9-9、CAl25、CAl5-3等。 6．感染性疾病 衣原体抗原、尿衣原体抗原、衣原 体抗原确认、弓形体IgG抗体、弓形体IgM抗体、风 疹病毒IgG抗体、风疹病毒IgM抗体、巨细胞病毒IgG 抗体、巨细胞病毒IgM抗体等。 二、 化学发光免疫技术常见的检测项目 7．糖尿病 胰岛素、C肽等。 8．心血管系统 肌酸激酶MB同工酶、地高辛、肌红 蛋白、心肌肌钙蛋白-I等。 9．病毒标记物 HIVl/2Ab、HBsAg、HBsAg确认、 HBsAb、HCVAb、HAV IgM、HAVAb、HBcAb、HBclgM、HBeAg、HBeAb等。 二、 化学发光免疫技术常见的检测项目 10．骨代谢 骨胶原酶、脱氧吡啶啉等。 11．过敏性疾病 总IgE、特异性IgE等。 12．治疗药物监测 茶碱、地高辛、环孢素、巴比 妥等。 二、 化学发光免疫技术常见的检测项目 化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的 化学能使分子激发而发光。化学发光免疫分 析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检 测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，分 为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫 分析和电化学发光免疫分析。 小 结 * 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 免疫学检验 第二十一章化学发光免疫技术 1.化学发光剂的概念及常用的化学发光剂。 2.