第三章 免疫.pptVIP

* 多克隆抗体 多个抗原决定基——机体——多种抗体的混合物 单克隆抗体（monoclonal antibody）为只针对某一特定的抗原决定基，纯度高的抗体 二 单克隆抗体 * 单克隆抗体概念： 每一克隆B细胞所产生的理化性状高度均一、组成均一、只与同一种抗原决定族反应的抗体，称为单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。 * * * * * 杂交瘤技术制备单克隆抗体流程 动物免疫 分离脾细胞 制备骨髓瘤细胞 细胞融合 HAT培养基选择杂交瘤细胞 阳性孔克隆化并扩大培养 再次克隆 克隆扩大培养 扩大培养收集上清液 动物接种收集腹水 单克隆抗体纯化保存 ELISA测血清 * 单克隆抗体的基本技术 1.抗原提纯与动物免疫： 抗原纯度高：电泳纯 与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠 2.细胞的选择： A 经过抗原免疫的B细胞（脾细胞）。 B 肿瘤细胞(多发性骨髓瘤细胞:Sp2/0）。 3.细胞融合： 融合剂：聚乙二醇 (PEG,常用聚合度1000~2000浓度w/v：40%) 细胞比例： 1:2~1:10，常用1:4。反应时间：2~4min。 * 4.培养基的选择：HAT培养基。含有三种关键成分：次黄嘌呤(hypoxanthine,H)氨甲蝶呤(aminopterin,A)和胸腺嘧啶核苷(thymidin