罗非鱼分子标记开发和C1抑制因子克隆.pdfVIP

个 tRNA 基因和 1 个结构调控区。采用三种不同的系统进化树构建方 法（最大简约法、最大似然法和贝叶斯法）进行的系统进化分析，结 果表明：尼罗罗非鱼与莫桑比克罗非鱼关系较近，而奥利亚罗非鱼与 前两者的关系较远。本部分为罗非鱼的遗传学与进化生物学等方面的 研究提供了线粒体 DNA 分子标记。 2、罗非鱼分子标记开发Ⅱ：尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼通用性微卫星 标记开发 尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种是当前罗非鱼养殖中的主 要对象，它们的遗传评估和种质鉴定等需要较为丰富的分子标记。国 外对尼罗罗非鱼的微卫星（SSR）分子标记进行了开发，但很少评估这 些标记在不同种间罗非鱼的通用性。本文以尼罗罗非鱼 DNA 为基础开 发 SSR 标记，共挑选了 256 个阳性克隆进行 PCR 验证，对其中的 207 个克隆进行了测序，发现 159 个克隆具有微卫星重复序列,共设计了 96 对罗非鱼微卫星引物。以 31 个非洲尼罗罗非鱼野生群体和 25 个奥利 亚罗非鱼野生群体进行了扩增验证，筛选通用性的 SSR 标记，最终获 得 27 对具有较高多态性的通用性引物。27 个引物在尼罗罗非鱼和奥利 亚罗非鱼群体中的平均等位基因数分别为 5.78 和 5.04；平均观察杂合 度分别为 0.6022 和 0.4199，平均期望杂合度分别为 0.7436 和 0.5928 。 尼罗罗非鱼群体中偏离哈代-温柏格平衡的位点有 4 个(P0.05)，奥利亚 罗非鱼中为 7 个。本部分为罗非鱼的种质评估和群体遗传学研究积累 了微卫星分子标记。 3 、尼罗罗非鱼 C1INH 基因克隆与表达分析 罗非鱼（tilapia ）是现在养殖鱼类中病害较少的种类之一，然而近 年来随着高密度养殖技术的发展，罗非鱼疾病发生的几率大大增加。 研究人员希望通过开发罗非鱼用疫苗和对其免疫系统的研究来探讨罗 II 非鱼的病害问题。补体系统（complement system ）是免疫系统之一， 它由一系列蛋白质分子组成，它能参与破坏或清除那些与抗体结合的 抗原，包括与抗体结合的细胞。本章对补体分子之一 C1 抑制因子 （Complement 1 inhibitor, C1INH ）基因进行了克隆和组织表达差异分 析。 利用相近物种的保守区设计引物，扩增出尼罗罗非鱼 C1INH 基因 部分序列，然后利用 3’RACE 和 5’RACE 技术扩增出全长序列。通过 扩增，尼罗罗非鱼 C1INH 基因的 cDNA 全长为 2,128bp ，5’UTR 长度 为 101bp、3’UTR 长度为 236bp 、开放阅读框（Open reading frame, ORF ） 长度为 1791 bp，编码 597 个氨基酸，预测蛋白的分子量为 67KDa 。半 定量 PCR （RT-PCR ）结果显示：C1INH 基因在肝中表达量最高，其次 是鳃、心、脑、肾，在肌肉、皮肤、肠中也有微量的表达。不同组织 的表达情况与人和小鼠的相似。 关键词：丽鲷科，罗非鱼，微卫星，线粒体基因组，C1 抑制因子 III Development of molecular markers and cloning of C1 inhibitor gene in Tilapias ABSTRACT Tilapias, members of the family Cichlidae, are an important economic fish species in the world. Cichlid fishes (Cichlidae) have been widely used to study evolutionary biology of fish as model species because of their diverse characteristics of morphology, behavior and ecology. As the fact that