苦参素对L02、HepG2细胞的增殖及对HepG2中MicroRNA-122、MicroRNA-21表达的影响.pdfVIP

4 结论41 参考文献42 综述47 攻读学位期间发表的学术论文目录60 致谢61 苦参素对L02、HepG2 细胞的增殖及对HepG2 中的 M icroRNA-122、MicroRNA-21 表达的影响 中 文 摘 要 目的：探讨苦参素对人正常肝细胞株 L02 和人肝癌细胞株 HepG2 细胞增殖 及对 HepG2 中 MicroRNA-122、MicroRNA-21 表达的影响。为苦参素抗肝癌作 用提供实验依据。 方法：体外培养人正常肝细胞 L02、肝癌细胞株 HepG2 细胞；以不加药作 为阴性对照组，不同浓度的苦参素作为实验组，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法 观察苦参素对 L02、HepG2 细胞增殖的影响；流式细胞术检测不同浓度苦参素 （1/3 IC 、2/3 IC 、IC ）作用 48h 后对 HepG2 细胞周期及凋亡的影响；实 50 50 50 时荧光定量 RT-PCR 法检测 IC50 苦参素作用 72h 对 HepG2 细胞 中的 MicroRNA-122、MicroRNA-21 表达的影响。 结果：MTT 检测结果显示：1、苦参素对人正常肝细胞增殖的影响：（1） 当作用时间在 24h 时，与阴性对照组相比较，0.5mg/ml 、1.0mg/ml 、2.0mg/ml 对正常肝细胞 L02 的增殖无明显抑制作用（P ＞0.05 ），3.0mg/ml、4.0mg/ml 、 8.0mg/ml 时对人肝正常细胞增殖有不同程度的抑制作用（P＜0.05），其抑制 率分别为 8.48%、15.43%、51.72%；（2）苦参素 1.0mg/ml 、2.0mg/ml 、3.0mg/ml、 4.0mg/ml、8.0mg/ml 各浓度组作用于 L02 细胞 48h 和 72h 的抑制率分别为 18.79%、26.06%、27.58%、31.52%、76.36%和 33.20%、38.53%、41.82%、55.61%、 89.95%。与 24h 相比较，作用 48h、72h 对正常肝细胞的增殖有不同程度的抑 制作用（P＜0.05 或 P＜0.01）。2、苦参素对肝癌细胞株 HepG2 细胞增殖的影 响：苦参素浓度分别为 0.5mg/ml 、1.0mg/ml 、2.0mg/ml 、4.0mg/ml 、8.0mg/ml ， - 1 - 分别作用于 HepG2 细胞 48h 和 72h 后的抑制率分别为 6.93%、16.95%、33.74%、 53.78%、65.95%和 9.40%、20.58%、38.82%、57.80%、86.56%，与对照组相比 较，实验组对肝癌细胞 HepG2 增殖的抑制差异有统计学意义 (P＜0.05)，且随 着苦参素浓度增加及作用时间的延长，苦参素抑制人肝癌细胞株 HepG2 细胞增 殖愈加明显，具有时间-剂量依赖性。流式细胞仪分析结果提示：与阴性对照 组相比较，经 1/3 IC 、2/3 IC 、IC 苦参素作用 HepG2 细胞 48h 后，G0/G1 50 50 50 期细胞逐渐增多，G2 期细胞逐渐减少；各 OM 浓度的凋亡率分别为 12.5%，15.6% 和 23.3%，分别与对照组相比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Real-Time PCR 结果显示：与阴性对照组比较，经 IC 苦参素处理 72h 后的HepG2 细胞株 50 MicroRNA-122 的表达上调，MicroRNA-21 的表达下调，其比率分别为 2.79 倍 和 0.44 倍。 结论： 1. 低浓度苦参素短时间对人正常肝细胞 L02 无明显损伤或毒副作用，高 浓度苦参素长时间对人正常肝细胞 L02 的增殖有不同程度的损伤或毒副作用， 且呈时间-剂量依赖性。 2.苦参素能显著抑制人肝癌细胞株 HepG2 细胞增殖，且具有时间-浓度依 赖性；其机制可能是阻滞细胞于 G0/G1 期和促进其凋亡；与 MicroRNA-122 表 达上调和 MicroRNA-21 表达下调有关。 关键词：苦参素；