nis Ⅰ基因克隆和强化表达及其发酵条件的优化.pdfVIP

2016 年第 57 卷第 8 期 均属磊叫怜 圄 文献著录格式:陈艺强，张栋，魏春捻，等. nis 1 基因克隆和强化表达及其发酵条件的优化[1].浙江农业科学， 2016 , 57 (8): 1264- 1269 , 1276 DOI: 10. 16178/j. issn. 0528-9017. nis 1 基因克隆和强化表达及其发酵条件的优化 陈艺强l ， 2 ，张栋1 ，魏春楼1 ，陈小龙1 • (1 浙江T业大学生物工程学院，浙江杭州 310014; 2. 浙江新银象生物工程有限公司，浙江夭台 317200) 摘 要: nis 1 基因能提高乳酸乳球菌 (Lactococcus lactis) 产 nisin 的效价。本文自行设计引物，从乳酸乳球 菌克隆获得了 nis 1 基因，构建了重组质粒 pMG36e-nis 1 并电转化至乳酸乳球菌中，经筛选得到 1 株阳性转化子。 考查了基因工程菌及原始菌株在不同时期 nis 1 基因的表达量，结果表明，重组菌在6 、 9 、 12 h 的表达量比原始 菌株分别提高了 0.44 、1. 53 、 2.28 倍。在摇瓶培养条件下，通过单因素研究和响应面法优化了重组菌的发酵培 1 养基和培养条件，优化结果为:}.W，糖 26.7 g - L -1 、蛋白陈 22.68 g • L- 1 7 g • L- 1 7 g . L- 、酵母粉 、牛肉膏 、 Na , HP0 2 1. 8 g . L- 1 MgS0 0.2 g • L 斗，最适 pH 值7.5 ，最佳接种量 3% ，发酵时间 12 h ，在该条件下，重组 4 、 4 菌的llISIO 发酵水平比原始菌株提高了 75.421岛。因此，在乳酸乳球菌中强化 nis 1 基因的表达是有效的。 关键词: nisin; PCR; 表达量;发酵;优化 中图分类号: Q78 文献标志码:A 文章编号: 0528-9017(2016)08-1264 -06 GenBa此报道的 nis 1 基因序列设计引物，以乳酸 乳酸链球菌素(nisin) 是由某些乳酸乳球菌 乳球菌的基因组为模板通过 PCR 扩增来获得 nis 1 在代谢过程中合成和分泌的具有很强杀菌作用的小 基因，双酶切后采用 DNA 连接酶连接，构建重组 肤。 msm 对许多革兰氏阳性菌，包括对食品有严 质粒 pMG36e-nis 1 ，经电转化至乳酸乳球菌中， 重危害的某些致病菌(葡萄球菌、分枝杆菌等) 再通过实时荧光定量 PCR 技术检测基因工程菌和 及主要腐败菌(芽抱杆菌、梭菌等)有强烈的抑 原始菌株在不同时期 nis 1 基因的表达量，确定 nzs 制作用。 msm 是世界上公认的安全防腐剂，采