离子交换色谱对抗VEGFR2单抗的电荷异质性分析.pdfVIP

微生物学免疫学进展 2014年 1O月第42卷第5期 ProginMicrobiolImmunol，Oct．2014，V01．42No．5 -17 · · 论 著 · 离子交换色谱对抗 VEGFR2单抗的 电荷异质性分析 于传飞，王文波，刘春雨，王兰，张峰，李萌，高凯 中国食品药品检定研究院，北京 100050 摘要：目的 采用离子交换高效液相色谱 (CEX．HPLC)分析抗VEGFR2(抗血管 内皮生长因子受体2)单抗制品的 电荷异质性。方法 应用CEX—HPLC技术，对VEGFR2单抗进行电荷异质性分析，并结合羧肽酶 B(CpB)和Ⅳ．糖 酰胺酶F(EndoF2)酶切，初步研究其电荷异质性的成因。结果 用 CEX—HPLC分析CpB酶切前后单抗，证明其碱 性变异体主要由C末端赖氨酸不均一性引起；分析EndoF2酶切前后处理的单抗，证明其酸性变异体部分由Ⅳ_糖末 端上的唾液酸修饰所引起。通过2种酶的顺序酶切可相对准确地分析含C一末端赖氨酸以及含唾液酸单抗的比例。 结论 采用 CEX—HPLC可较好地分析单抗的电荷异质性 ；并结合合适的酶切处理，可判断单抗主要电荷异质性的 来源 ，为保证单抗制品生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。 关键词 ：血管内皮生长因子受体2单抗 ；电荷异质性 ；离子交换高效液相色谱；不均一性；唾液酸修饰 中图分类号 ：R392．11 文献标志码 ：A DOI：10．13309／j．cnki．pmi．2014．05．004 Analysisofchargeheterogeneityforanti·VEGFR2monoclonal antibodybyCEX．HPLC YU Chuan—fei，WANG Wen—bo，LIU Chun—Yu，WANG Lan，ZHANG Feng，LIMeng，GAO Kai NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beng100050，China Correspondingauthor：C,aoKai，E—maill：gaokai@nicpbp．org．cn Abstract：Objective Toanalyzethechargeheterogeneityforanti—VEGFR2monoclonalantibodywithCEX—HPLC．Meth- ods Thechargeheterogeneityofranti—VEGFR2 monoclonal antibodywasanalyzed，andtheoriginal causeofthechrage heterogeneitywasstudiedbyCEX-HPLC，andincombinationwiththeconsecutivedigestiontreatmentsofCpB andEndoF enzymes．Results Thecomparisonbetweenuntreatedna dCpBtreatedantibodyrevealedthatthebasicvariantsweremain— lycausedbynon-homogeneityofC-terminallysineonantibody，andthecomparisonbetweenuntreatedandEndoFtreated antibodyshowedhtattheacidicvariantswerepartiallycausedbysialicacidmodificationattheN-glycantemr inal onanti— body．Furthermore-therelativelyaccurateratiooftheantibodywithC—temr inall