人参茎叶皂甙对鸭禽流感疫苗免疫增强作用及抗氧化功能影响.docVIP

人参茎叶皂甙对鸭禽流感疫苗免疫增强作用及抗氧化功能影响 　　摘要：为探讨人参茎叶皂甙（GSLS）对鸭流感疫苗的免疫增强作用和抗氧化功能的影响，给鸭群饮水口服GSLS，同时接种禽流感疫苗，通过检测血清抗AIV特异性HI效价、免疫器官指数、淋巴细胞增殖转化指数、细胞因子和肠黏膜SIgA水平，评价GSLS的免疫增强作用；通过测定血清丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量，评价GSLS对机体抗氧化功能的影响。结果表明：在28和35日龄时，饮水口服中剂量GSLS组鸭血清抗AIV特异性HI效价显著高于对照组（P0.05），1份+GSLS组鸭血清抗AIV特异性HI效价显著提高（P 　　皂甙是由甙元与糖相连构成的糖甙类化合物，是中药人参的有效成分之一，研究发现其对神经系统、心血管系统和免疫系统产生广泛的药理作用[3]，是人参发挥补气安神的药理作用基础之一。人参皂甙广泛来源于人参的根、茎、叶、花等部位[4]，人参茎叶皂甙（GSLS）就是从人参的茎和叶中提取的总皂甙。与根皂甙相比，GSLS来源于中药人参收获的废弃部分――茎和叶，在畜牧业中推广具有比较明显的成本优势。而且，研究发现GSLS具有类似于根皂甙的多种皂甙单体，有些单体含量甚至高于根皂甙中的含量[5]。目前，已经有GSLS调节小鼠、鸡等动物免疫功能的研究报道，但尚未见在肉鸭上的研究报道。因此，有必要开展GSLS调节肉鸭免疫功能的研究，为提高鸭流感防控技术水平和养殖效益提供重要的理论基础 1材料与方法 1.1试验材料 GSLS（吉林省宏久生物科技股份有限公司），ConA和LPS（美国Sigma公司提供），AI灭活疫苗（哈尔滨维科生物技术开发公司），SIgA、MDA（malondialdehyde， 丙二醛）、SOD（superoxide dismutase， 超氧化物歧化酶）、IL-4和IFN-γ等ELISA试剂盒（北京华英生物技术研究所） 1.2试验动物 1日龄樱桃谷鸭，购自潍坊某肉鸭养殖场 1.3仪器设备 二氧化碳培养箱（力康生物医疗科技控股有限公司）；恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）；生物安全柜（苏州安泰空气技术有限公司）；超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）；酶标仪（美国热电公司） 1.4试验方法 试验一：将1日龄肉鸭分成4组，每组50只，分别设对照组、高剂量组、中剂量组和低剂量组。对照组给予正常的饲养管理，高、中、低剂量组分别在5～14日龄时饮水口服12、6、3 mg/kg bodyweight（BW）的GSLS。在14日龄时给肉鸭接种1份AI灭活疫苗。分别在1、7、14、21、28、35和42日龄时对肉鸭进行称重和采血，离心分离血清，检测血清抗AIV特异性HI效价，并测定28日龄各组抗氧化指标（MDA和SOD）变化。每次试验操作按照先称重，再采血，然后饮水给药，最后接种疫苗的顺序进行。HI效价测定采用血凝抑制（HI）试验，参照《高致病性禽流感诊断技术 GBT 18936―2003》操作步骤进行。MDA和SOD参照北京华英生物技术研究所试剂盒说明书进行操作 试验二：将1日龄健康肉鸭分成5组，每组50只。分别设1份疫苗组、1份+GSLS组、0.75份+GSLS组、0.5份+GSLS组、0.25份+GSLS组。1份疫苗组，在14日龄时接种1份AI灭活疫苗；1份+GSLS组，在14日龄时接种1份AI灭活疫苗，并在5～14日龄期间饮水口服由试验一确定的剂量即6 mg/kg BW的GSLS；0.75份+GSLS组，在14日龄时接种0.75份AI灭活疫苗，并在5～14日龄期间饮水口服6 mg/kg BW的GSLS；0.5份+GSLS组，在14日龄时接种0.5份AI灭活疫苗，并在5～14日龄期间饮水口服6 mg/kg BW的GSLS；0.25份+GSLS组，在14日龄时接种0.25份AI灭活疫苗，并在5～14日龄期间饮水口服6 mg/kg BW的GSLS。各组分别在免疫后0、1、2、3和4周龄时对肉鸭进行称重和采血，离心分离血清，检测血清抗AIV特异性HI效价。每次试验操作按照先称重，再采血，然后饮水给药，最后接种疫苗的顺序进行。在免疫后1、2和3周龄时，对1份组和1份+GSLS组肉鸭，每组取8只，颈部放血处死，无菌操作摘取脾脏、胸腺和法氏囊，进行称重，测定免疫器官指数（免疫后2周）；制备脾淋巴细胞悬液，测定淋巴细胞增殖转化水平（免疫后2周）和脾淋巴细胞上清中细胞因子（IL-4和IFN-γ）分泌水平（免疫后2周和3周）；收集空肠，刮取肠黏膜，进行肠道SIgA浓度测定（免疫后1周和2周）。免疫器官指数和淋巴细胞增殖转化指数测定参照相关文献操作进行[6， 7]。SIgA、IL-4和IFN-γ参照北京华英生物技术研究所试剂盒说明书进行