H5亚型禽流感病毒现场快速检测技术.PDFVIP

ICS 11.220 B41 中华人民共和国国家标准 GB/T ××××—×××× H5 亚型禽流感病毒现场快速检测技术 Protocol of the rapid detection assay on-site for H5 subtype of avian influenza virus （送审稿） ××××- ××- ××发布 ××××- ××- ××实施 中 华 人 民 共 和 国 发布 国家质量监督检验检疫总局 1 GB/T ××××—×××× 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则第1 部分：标准的结构和编写规则》制定。 本文件的某些内容有可能涉及专利，应按照专利法的规定执行。本文件的发布机构不应承担识别这 些专利的责任。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本标准起草单位：略。 本标准主要起草人：略。 I GB/T ××××—×××× H5 亚型禽流感病毒现场快速检测技术 1 范围 本标准规定了H5亚型禽流感病毒荧光微球快速免疫层析检测技术和胶体金快速免疫层析检测技术 及操作方法。 本标准适用于H5亚型禽流感病毒的流行病学调查、大规模筛查检测和疫情监测，可用于现场检测组 织样品、拭子悬液及粪便样品等。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 3 原理 本方法是采用荧光微球或胶体金标记技术，应用膜免疫层析双抗体夹心法来检测样品中的H5亚型禽 流感病毒。其主要原理是：将一种抗H5亚型禽流感血凝素的特异性单克隆抗体标记荧光微球或胶体金后 渗入试纸条的样品垫中，同时将另一种抗H5亚型禽流感血凝素的特异性单克隆抗体固定于硝酸纤维素膜 的测试区带 （T线），将抗鼠IgG抗体固定于硝酸纤维素膜的质控区带(C线)。加入待测样品后，基于侧 流免疫层析原理，样品中的H5亚型禽流感病毒，先与样品垫中已标记了一种单抗的荧光微球或胶体金结 合，流向测试区，再与另一种单抗结合，形成抗体-抗原-荧光微球或胶体金标记抗体免疫复合物；同时， 过剩的标记了单抗的荧光微球或胶体金流一直往前侧流至质控区，与抗鼠IgG抗体结合，形成抗体-荧光 微球或胶体金标记抗体复合物。荧光微球免疫层析检测试纸在紫外光激发下读取结果，在质控区出现荧 光条带前提下，测试区出现荧光条带为阳性结果，未出现荧光条带为阴性结果。胶体金免疫层析检测试 纸可直接肉眼观察，在质控区出现红色检测条带前提下，测试区出现红色条带为阳性结果，未出现红色 条带为阴性结果。 4 仪器、材料与试剂 4.1 仪器 4.1.1 紫外分析仪和荧光试纸检测仪。 4.1.2 组织研磨器。 4.1.3 低温高速离心机。 4.1.4 微量移液器。 4.1.5 冰箱。 4.1.6 计时器。 4.2 材料 1