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第七章 微生物的遗传变异和育种 第一节 遗传变异的物质基础 一、3个经典实验 （一）经典转化实验 （二）噬菌体感染实验 （三）植物病毒的重建实验 二、遗传物质在微生物细胞内存在的部位和形式 （一）7个水平 1.细胞水平 在不同种微生物或同种微生物的不同细胞中，细胞核的数目通常有所不同。 2.细胞核水平 除核基因组外，在真核生物和原核生物的细胞质（酵母菌2微米质粒例外地在核内）中，多数还存在核外染色体。 3.染色体水平 （1）染色体数 （2）染色体倍数 指同一细胞中相同染色体的套数。 在原核生物中，通过转化、转导或接合等过程而获得外源染色体片段时，只能形成一种不稳定的、称作部分双倍体的细胞。 4.核酸水平 （1）核酸种类 （2）核酸结构 （3）DNA长度 5.基因水平 原核生物的基因调控系统如下： 基因及其表达产物的名称书写标准： 6.密码子水平 7.核苷酸水平 （二）原核生物的质粒 1.定义和特点 2.质粒在基因工程中的应用 3.质粒的分离与鉴定 4.质粒的种类 5.典型质粒简介 （1）F质粒 又称F因子、致育因子或性因子，是细菌决定性别并有转移能力的质粒。 其上有转座因子的存在，可以整合到宿主核基因染色体上的一定部位，并导致各种Hfr菌株的产生。 （2）R质粒 又称R因子或抗性因子 一般是由两个相连的DNA片段组成，其一称抗性转移因子/RTF，具有转移功能，其二为抗性决定因子/r因子，含各种抗性基因。 （3）Col质粒 又称大肠杆菌素质粒或产大肠杆菌素因子。许多细菌都能产生抑制或杀死其他近缘细菌或同种不同菌株的代谢产物——细菌素。 凡带Col质粒的菌株，因质粒本身可编码一免疫蛋白，故对大肠杆菌素有免疫作用，不受其伤害。 （4）Ti质粒 植物基因工程中使用广泛。 （5）Ri质粒 （6）mega质粒 即巨大质粒 （7）降解性质粒 （8）生理功能性质粒 第二节 基因突变和诱变育种 基因突变 突变类型 营养缺陷型 抗性突变型 条件致死突变型 Ts突变株即温度敏感突变株：突变株使某些重要蛋白质的结构和功能发生改变，以致会在某特定温度下具有功能，而在另一温度下则无功能。 形态突变型 抗原突变型 包括细胞壁缺陷变异（L型细菌等）、荚膜或鞭毛成分变异等，一般也属非选择性突变。 产量突变型 产量变高的正突变；变低负突变。 突变率 基因突变的特点 基因突变自发性和不对应性的实验证明 Luria等的变量实验 Newcombe的涂布实验 Lederberg等的影印平板实验 通过影印接种法，可从非选择性条件下生长的微生物群体中，分离到过去只有在选择性条件下才能分离到的相应突变株。 基因突变及其机制 诱发突变 碱基的置换 直接引起置换的诱变剂 间接引起置换的诱变剂 移码突变 染色体畸变 2.自发突变 紫外线对DNA损伤及其修复 嘧啶对UV的敏感性比嘌呤强得多，其光化学反应产物主要是嘧啶二聚体和水合物，相邻嘧啶形成二聚体后，造成局部DNA分子无法配对，从而引起微生物的死亡或突变。微生物具有多种修复受损DNA的作用。 光复活作用 经UV照射后带有嘧啶二聚体的DNA分子，在黑暗下会被一种光激活酶——光解酶结合，这种复合物在300-500nm可见光下时，其中的酶会因获得光能而激活，并使二聚体重新分解成单体。 切除修复 突变与育种 自发突变与育种 从生产中育种 定向培育优良菌株 定向培育:利用微生物的自发突变率,并采用特定的选择条件,通过对微生物群体不断移植以选育优良菌株的古老方法。 诱变育种 诱变育种的基本环节 诱变育种中的几个原则 艾姆斯实验 处理单细胞或单孢子悬液的两个原因——造成不纯菌落的存在： 剂量存活率曲线和剂量诱变率曲线 3.3类突变株的筛选方法 产量突变株的筛选 抗药性突变株的筛选 梯度平板法：是一种含有某药物的梯度浓度的琼脂培养基平板，它由含药物的上半个斜面和不含药物的下半个斜面分两次浇合而成。 营养缺陷型菌株的筛选 与筛选营养缺陷型菌株有关的3类培养基 与营养缺陷型突变有关的3类遗传型个体 营养缺陷型的筛选方法 分为诱变、淘汰野生型、检出和坚定四个环节 第三节 基因重组和杂交育种 原核生物的基因重组 原核基因重组的特点：片段性；单向性；多样性。 转化 定义：受体菌直接吸收供体菌的DNA片段而获得后者部分遗传性状的现象，称为转化或转化作用。通过转化方式而形成的杂种后代，称转化子。 转化微生物的种类 在实验室中常用的一些属于肠道菌科的细菌如大肠杆菌等很难进行转化，为克服这一不利条件，可选用有利于DNA透过细胞膜的氯化钙处理大肠杆菌的球状体，使之发生低频率的转化。 有些真菌在制成原生质体后，也可实现转化。 感受态 凡能发生转化，其