变性梯度凝胶电泳-转载.pptVIP

从这一步开始，带上手套。 配置试剂时一定要用去离子水，可以配置不同梯度的变性溶液备用，注意变性溶液中大颗粒的过滤及脱气。 制胶洗膜时用的各个容器要用去离子水洗涤干净，以防止氯离子污染。 灌胶前准备好所有需要的东西，试剂、枪头，甚至物品摆放的位置。 制胶是实验的关键，在往玻璃板中灌胶时要匀速地转动滑轮，将凝胶液匀速地灌入玻璃板。 灌胶后立刻清洗注射器，以防丙烯酰胺凝固，堵塞管子。 DGGE制胶主体部件： 上样的胶孔要用去离子水冲洗干净并吸干。 PAGE胶装入电泳支架时注意用去离子水润滑橡胶垫。装入后在胶孔中加入缓冲液。 上样时上样器要深入胶孔底部。 尽量在同一个胶上比较所有样品，每一个胶上要有marker lane。 将胶放入电泳槽中时注意正负极。 建议低电压电泳一段时间，在样品完全进入胶中之后再升电压。 停止电泳后注意把电泳仪调零之后在关闭电源 剥胶需要细致，用好去离子水和保鲜膜。 染色前做好胶样品顺序的标记。 银染、EB染色和SYBRGreen染色。 ——垂直电泳 获得高质量的DGGE图谱。 DGGE条带的回收 －－注意紫外条件下操作的安全。 －－尽量减少DNA在紫外下的照射时间。 －－不同长度目标片段从切胶条带中的回收。 测序注意要点 －－回收条带的DNA在PCR扩增后，一定要克隆 －－确认克隆与母条带可以跑