基于等离子体聚合膜的日本血吸虫压电免疫传感器的研究.pdfVIP

基于等离子体聚合膜的日本血吸虫压电免疫传感器的研究 王桦吴朝阳黄敬良沈国励t俞汝勤 (湖南大学化学计量学与化学生物传感技术教育部重点实验室．化学化工学院，长沙410082) B本血吸虫病是分布较广的一种人畜共患的寄生虫病。近年来，检测血清中日 本血吸虫特异性抗体的免疫诊断法应用较广…。本文研制的传感器基于正丁胺等离 子体聚合膜，采用聚电解质吸附固定化方法固定活性物质，以牛血清白蛋白(BSA) 和正常兔血清(NRS)共同封闭晶振上非特异性吸附位点，用以直接测定血清中日 本血吸虫抗体。该传感器采用的封闭方法有效地消除了测定时的非特异性吸附，采 用的固定化方法明显优于常见的戊二醛键合固定法。通过对一系列不同感染程度兔 血清的测定，结果表明，该传感器可用于日本血吸虫病的临床定性和定量检铡。 1． 实验部分 1．1 仪器与试剂 电容耦合式等离子体淀积设备(电子部第48研究所)；CN3165型高分辨记数 器(石家庄无线电四厂)：9MHz，AT切型石英晶振(北京无线电器材厂)。日本 4．2 6．5 mgtmL)·正 mg／mL)，日本血吸虫抗体(SjAb 血吸虫32KD分子抗原(SjAg 常兔血清(NRS)，不同感染程度的兔血清样本(tRS)，均由湖南医科大学寄生虫 教研室提供；聚苯磺酸钠(PSS，Sigma)；牛血清白蛋白(BSA，上海生物化学试 剂有限公司)；其它试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。 1．2 实验方法 1．2．1 固定化方法的选择 mg／mL 按文献121，将两片晶振沉积正丁胺等离子体聚合膜，一片置于PSS(2 mg／vL) DH2．0)溶液浸泡30rain，以自组装聚电解质；另一片置于戊二醛溶液(2．5 中浸泡60rnin．以修饰戊二醛；均用PBS缓冲液洗涤，水洗，晾干备用。 1．2．2检测方法 取20 5．2的PBS缓冲液稀释至30此，分别滴加于两种晶振 gLSjAg并用pH 表面，均在37c。的恒温箱内温育40rain，取出水洗，晾干；均按同样操作，以20灿 BSA与NRS混合液(1：1)封闭晶振上非特异性活性位点。将两种晶振分别安装于 mL 盛有3．0 7．2)的检测池中以检测SjAb．记录免疫反应的响应 PBS缓冲液(pH 频率至反应结束．SjAb的浓度与其响应频移值成线性关系。 1．23 晶振的再生 mol／LNaOH和0．5 采用PSS吸附固定法的晶振，每次使用后，依次置于0．01 rain，晾干后备用。 mol／L HCI和水溶液中各洗涤10 NaCI混合溶液、0．叭mol／L 2．3的盐酸与甘氨酸缓 采用戊二醛共价键合固定的晶振，每次使用后，用pH min，晾干后各用。 冲溶液清洗30rain，以解离Ag．Ab键，再水洗10 2．结果与讨论 2．1 固定化方法的比较 考察了晶振采用PSS吸附固定法与采用戊二醛键合同定法包被词定SjAg的情 况。首先，PSS的自组装时间(30wan)小于戊二醛的结合时间(60min)，这是因 为前者的自组装是物理吸附作用，而后者的结合是共价键合作用，需要活化能，从 而后者的结合速度较慢。其次，晶振采用戊二醛键合法包被SjAg时，响应的气相 133 频移值较大，表明其包被sjAg的量也较多，但其包被的SjAg分子排列致密