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第二节 生物芯片技术 生物芯片是指在面积不同的基片（玻璃、硅片、尼龙膜、金属、凝胶等）表面上有序地点阵排列了一系列识另分子(cDNA、DNA、肽、蛋白质或寡核苷酶等)，固定在每一点阵上的分子都是可寻址的；然后在相同条件下，点阵上的分子与其“配体”分子反应，反应结果用核素、荧光、化学发光或酶标法显示，通过计算机软件分析，综合在可读的IC总信息。 第三节 转基因动物 一、转基因动物的概念及发展史 转基因动物(transgeni animal)是指所有细胞基因组中稳定地整合由人工导入的外源基因，能正常表达并能遗传给后代的一类动物。仅有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物，称为嵌合体动物(chimera animal)。 二、转基因动物技术 转基因动物技术的基本原理：将经过基因工程改造过的目的基因（或基因组片段，或人工染色体），用不同的基因转移方法导入供体动物的受精卵（或早期胚胎细胞），然后将此卵或细胞植入代孕母体动物的输卵管（或子宫）中，使其孕育成熟，产下携带有外源基因的转基因动物。 产生转基因动物的关键技术包括： 外源目的基因的获得和构建（含人工染色体）； 将外源目的基因有效地导入生殖细胞或胚胎干细胞； 利用合适的宿主动物或体外培养系统，使转基因胚胎发育； 鉴定、筛选理想的转基因动物品系。 制备转基因动物的转基因方法主要包括： 显微注射法 胚胎干细胞法 反转录病毒载体法 精子载体法 其他方法 常用免疫学相关实验技术及方法 第一节 免疫学方法概论 一、免疫学方法的发展史 1976年：Jenner发明了接种牛痘方法预防天花 2个世纪后被广泛接受，1979年（WHO）天花灭迹。 19世纪末期：koch病原体是感染性疾病病因 促进了实验免疫学的发展。 19世纪80年代：Pasteur预防鸡霍乱的疫苗 狂犬病疫苗 1888：Behring发现了抗体 Methchnikoff发现了巨噬细胞 20世纪初：发现了调理素，体液因素可影响吞噬细胞功能 1900-1930：认识了过敏反应，发现了血清病 Arthus反应，皮肤反应 调理作用，补体结合反应 疫苗研究有了新发展：BCG——结核 白喉毒素——白喉 1935-1957：抗体纯化，鉴定及测定技术、 凝胶内沉淀技术，抗原抗体、 免疫电泳等血清血技术 1959-1974：放射标记免疫技术、酶标免疫技术、 生物素-亲和素标记免疫技术、 荧光标记免疫技术、金(银)标记免疫等技术； 化学发光免疫技术、免疫分子转染技术、 细胞和细胞因子测定技术 20世纪70年代后期：免疫及分子生物学技术发展成熟， 单克隆抗体问世，组织相容性抗原、 B细胞免疫球蛋白基因重组，T细胞受体 1980：PCR技术 生物芯片技术 转基因动物技术 免疫学方法就是通过实验证实机体免疫反应的过程。 基本参与单位有：抗原 抗体 免疫细胞和免疫分子 第二节 体液免疫学方法 一、抗原制备 1. 天然抗原制备 (1)粗抗原的提取：冻融法、冷热交替法、超声法(1-2HE) (2)粗抗原纯化： 选择性沉淀法：盐析沉淀法、核酸沉淀法 凝胶过滤和离子交换层析 亲和层析法 蛋白电泳 2. 合成抗原制备 化学合成高分子氨基酸聚合物，即多肽。 合成肽与载体蛋白连接后能有效诱导抗体产生免疫应答 常用方法：tea bag method 纯化方法：反向高效液相色谱法 二、抗体制备 1. 多克隆抗体制备(polyclonal antibody) 多克隆抗体是指在自然免疫或免疫动物后产生的具有不同特异性和亲和性的多种抗体混合分子。具有抗多种不同抗原的表位。 2. 单克隆抗体制备(monoclonal anti