免疫组化法证实牛蛙肥大细胞中类胰蛋白酶的存在.pdfVIP

2006学术年会 免疫组化法证实牛蛙肥大细胞中类胰蛋白酶的存在。 杨冬梅“ 许乐仁… (贵州大学动物医学系贵阳S．soozs) 摘要：采用小鼠抗人类肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体从l通过问接免疫过氧化物酶技术．对牛蛙的舌、肠和脾以 厦人食道癌组织石蜡切片中的肥大细胞进行染色。首次证实了牛蛙肥大细胞胞浆中类胰蛋白酶的存在．且单克隆抗体从l 与牛蛙肥大细胞中的类胰蛋白酶可获得良好的交叉反应。类胰蛋白酶阳性细胞多位于牛蛙肠黏膜固有层，少量见于肠绒 毛基底部厦舌黏膜下腺体周围。人食道癌问质中可见多量类胰蛋白酶阳性细胞。 关键词：牛蛙；肥大细胞；类胰蛋白酶；免疫纽化。 类胰蛋白酶(tI-yptase)是肥大细胞介质中一种重要的中性蛋白酶。它与胰蛋白酶相似，属丝氨酸蛋白 进行酶组织化学染色时发现肥大细胞能够被染色，说明肥大细胞中存在胰蛋白酶样活性物质…。Schwartz 等(1981)在对这些物质进行纯化后发现这些物质90％以上具有胰蛋白酶样活性，故命名为类胰蛋白 酶…。该酶在肥大细胞中的贮存和表达具有高度选择性，不能在其他类型细胞中被检出，故类胰蛋白酶 成为鉴定人肥大细胞的特异性标志”J。于是小鼠抗人肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体及其免疫组化技 术o’4J，以及鉴定人肥大细胞类胰蛋白酶的酶组织化学技术应运而生”]。 术鉴定人肥大细胞”J。Xu等(1997)用同样的方法在猪和牛的组织中获得了良好的交叉反应，并证实了这 些动物的肥大细胞中类胰蛋白酶的存在”1。采用鉴定人肥大细胞的一种酶组织化学技术也发现猪、牛、 绵羊、犬、猫和大鼠等多种动物的肥大细胞中存在类胰蛋白酶”J。这些工作说明了鉴定人肥大细胞的一 些组织化学技术也适用于多种动物肥大细胞的研究，且类胰蛋白酶也是多种动物肥大细胞的特异性标 志‘4’“。 对蛙科动物等两栖类动物的肥大细胞已有所研究”】。但迄今为止，尚未见有关这些低等脊椎动物的 肥大细胞是否含有中性蛋白酶的研究报道。本实验采用小鼠抗人肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体从l， 通过间接免疫过氧化物酶技术对牛蛙(Ramcatesbeiana)组织中类胰蛋白酶阳性肥大细胞存在的可能性进 行了探索性研究。为证实该技术的可靠性，同时使用人食道癌组织作为阳性对照，并与肥大细胞经典的 甲苯胺兰常规染色法进行了比较。 1材料与方法 1．1主要试剂 ·基金项目：国家自然科学基金项目。 oota．Tel：O$31— 抖作者简介：杨冬梅(1980一)，女，内蒙呼和浩特人，硕士研究生。研究方向：细胞生物学。Email：ydsmeimeng@schu 8297824。 ’什通讯作者：xaleren@yalmo哪。 兽医部分 剂；30％tt202以及山羊血清等，均购自Pmmab远泰生物技术有限公司。 1．2组织采集及处理 市售健康牛蛙(Ram ea蛐)(50094-509)／i：只，捣毁延髓处死后迅速取其小肠，舌和脾，于10％中 院获得人(成年男性)食管癌手术切除组织一份，处理同上，以供阳性对照。 1．2．1免疫组化技术 牛蛙组织及人食管癌组织切片依次经下述处理：①脱蜡：--甲苯IlOmin一二甲苯1IlOmin。②水化： 酸酒精分化。⑩脱水，透明，封片，镜检。阴性对照切片不加二抗，其他步骤同。 1．2．2常规组织化学染色 采用文献“1中叙述的0．5％甲苯胺兰(0．5mol／LHca)染色法进行。 2结果 2．1免疫组化染色 两种固定液固定的人食管癌组织镜检时，在肿瘤间质中均能观察到许多胞浆为棕黄色的细胞，即类 中的阳性细胞较NBF固定组的阳性细胞边缘整齐。 图版l 图版2 图版3 图版1人食管癌间质中的肥大细胞。石蜡切片，Bouin’s液固定，AAl免疫染色。X400围版2牛蛙肠 固有层中的肥大细胞，圆形或椭圆形，胞浆染为棕黄色。石蜡切片，Bouin’s液固定．AAl免疫染色。X400 图版3牛蛙舌粘胰下腺体周围的肥大细胞，石蜡切片．Bouifl’s液固定．AAl免疫染色。X,10