全细胞核酸适配体筛选研究进展.PDFVIP

２０１６年４月 Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．４ Ａｐｒｉｌ ２０１６ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ３８２～３８８ 多尺度靶标的核酸适配体筛选研究进展专栏 ·专论与综述 ＤＯＩ：１０．３７２４／ ＳＰ．Ｊ．１１２３．２０１５．１２０１５ 全细胞的核酸适配体筛选的研究进展 刘品多，　 屈　 锋∗ （北京理工大学生命学院，北京 １０００８１） 摘要：核酸适配体（ａｐｔａｍｅｒ）是从人工合成的随机单链 ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）或ＲＮＡ 文库中筛选得到的，能够高亲和力、 高特异性地与靶标结合的ｓｓＤＮＡ或ＲＮＡ。 核酸适配体的靶标范围广，可包括小分子、蛋白质、细胞、微生物等多种 靶标。 其中以细胞为靶标的适配体在生物感应、分子成像、医学诊断、药物传输和疾病治疗等领域有很大的应用潜 能。 但全细胞的核酸适配体筛选过程复杂，筛选难度大，筛选的适配体性能不佳是导致目前可用的适配体非常有 限的主要原因。 由于细胞表面蛋白质在提取纯化过程中分子结构和形态会发生改变，故以膜表面蛋白质为靶标筛 选的适配体很难应用于识别整体细胞。 以全细胞为靶标的核酸适配体筛选则不需要准确了解细胞表面的分子结 构，筛选过程中可保持细胞的天然状态，以全细胞为靶标筛选出的核酸适配体有望直接用于全细胞识别。 本文总 结了２００８～２０１５年全细胞的核酸适配体筛选的研究进展，介绍了靶细胞的分类、核酸库的设计、筛选条件和方法以 及核酸适配体的亲和力表征方法等。 并列出全细胞靶标的核酸适配体序列。 关键词：核酸适配体；细胞；筛选；指数富集的配基系统进化技术；综述 中图分类号：Ｏ６５８　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃８７１３（２０１６）０４⁃０３８２⁃０７ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｄｖａｎｃｅｓ ｏｆ ａｐｔａｍｅｒ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ ＬＩＵ Ｐｉｎｄｕｏ，ＱＵ Ｆｅｎｇ∗ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｐｔａｍｅｒｓ ａｒｅ ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ （ｓｓＤＮＡ） ｏｒ ＲＮＡ ｔｈａｔ ｍａｙ ｂｉｎｄ ｔｏ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅ⁃ ｃｕｌｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｃｅｌｌｓ，ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ａｎｄｏｔｈｅｒｔａｒｇｅｔｓ．Ｔｙｐｉｃａｌｌｙ，ａｐｔａｍｅｒｓａｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｂｙ ａ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｒｅｆｅｒｒｅｄ ｔｏ ａｓ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ （ＳＥＬＥＸ）． Ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｈａｔ ｂｉｎｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｈａｔ ｒｅｓｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｈａｖｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｕｔｉｌｉｔｙ ｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｓ ｏｆｂｉｏｓｅｎｓｅｒ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｍａｇｉｎｇ，ｍｅｄｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏ⁃ ｓｉｓ，ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ａｎｄｄｉｓｅａｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｉｌｌｎｏｗ，ａｖａｉｌａｂｌｅａｐｔａｍｅｒｓａｒｅｖｅｒｙ ｌｉｍｉｔ⁃ ｅｄ ｍａｉｎｌｙ ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎｄ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｐｔａｍｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｏｏｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｕｓｉｎｇ ｐｕｒｉｆｉｅｄ