第六章目的基因导入受体细胞及重组子的筛选研讨.ppt

■酶切电泳筛选法 通过直接电泳检测法筛选出来的重组子，插入的外源DNA不一定是目的DNA片段。通过将重组子中的质粒进行酶切，然后再进行电泳，就可将阳性克隆子筛选出来。 ■PCR检测法 外源DNA的两侧序列多为已知序列，通过PCR扩增外源DNA，然后对扩增产物进行电泳，就可筛选出阳性克隆子。 3.核酸分子杂交检测法 4.免疫化学检测法 基本过程与核酸分子杂交检测法相似，不同的是该法使用抗体探针，而非DNA探针来鉴定目的基因表达产物。因而其前提 条件是克隆基因可在宿主细胞内表达，并且有目的蛋白的抗体。 ■放射性抗体检测法 ■免疫沉淀检测法 ■酶联免疫检测法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA） 采用非放射性标记物（辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）偶合第二抗体，然后与目的蛋白抗原-抗体复合物结合，通过检测非放射性标记物从而检测到相应的蛋白抗原。 5.转译筛选法 转译筛选法是通过体外转译的手段鉴定阳性克隆的方法，可分为杂交抑制转译和杂交选择转译两种检测方法。 ■杂交抑制转译 要求：被研究的目的基因编码有丰富的mRNA 。 原理： DNA 蛋白质 mRNA 蛋白质 × 杂交 转化菌落 提取重组DNA 与总mRNA杂交 形成DNA-RNA杂种分子 将总mRNA（包括DNA-RNA分子）提取出来 体外转译 蛋白电泳放射自显影 总m