脑缺血再灌注损伤的研究进展_培训课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 4.局灶性脑缺血动物模型 （1）大鼠大脑中动脉阻断（MCAO） ? 大鼠大脑中动脉 (MCA) 阻断模型广泛用于评价多种化合物在脑缺血过程中的神经保护作用。 A. 化学梗塞法 B. 电烧灼法 C. 插线法 * 4.局灶性脑缺血动物模型 1.m.a. 9.Basilar a. 2.Sup. Cerebellar.a. 10.Lingual a. 3.Mastoid Bulla 11.Ext. max. a. 4.Pterygopal. a. 12.Sup. Thyr. a. 5.Ant. Cerebral. a. 13.Occip. a. 6.Mid. Cerebral a. 14.Ext. carotid a. 7.Post. Cerebral a. 15.Com. Carotid a. 8.Int. carotid a. Diagram of cerebrovascular anatony in rats * 缺血部位对大鼠脑梗死发生率的影响 * （2）光化学法引起的大鼠局灶性脑缺血模型 ?目的与原理 在给大鼠注射染料 Rose Bengal之后，用光导纤维通过颅骨给予强的绿光照射，可导致大鼠局灶性脑缺血。可以采用多种指标研究脑梗塞的情况，如梗塞体积，局部脑血流和葡萄糖的利用。 操作步骤 大鼠正中切开头皮，暴露右侧颅骨，用氙灯发射强绿光， 经一滤波器和一滤热器直接引导至颅骨前囟点照射15 min。本实验技术是无创性的，因此在缺血期间不用监测血气和血压，但需要控制肛温和血浆葡萄糖的水平。 * 5.弥漫性脑缺血动物模型 微球颗粒动脉注射法 自身血凝集块注射法 * 整体动物脑缺血实验模型选择 研究目的：符合解决问题的需要， 动物特点：模型制备条件 检测内容：适合检测要求 给药要求：适合给药特点 其他条件： * 整体动物脑缺血模型检测方法 1.体外检测法（ex vivo） 细胞功能 线粒体功能 细胞膜功能 * 整体动物脑缺血模型检测方法 2.形态学观察法 缺血区显色大体观察 水肿程度测定 细胞亚细胞形态观察 放免、免疫组化实验法 原位杂交实验 * 2.形态学观察法  缺血区显色大体观察 处死后迅速取脑，-10 ℃ 冷冻 10 min，将前脑经冠状切面切成8片，TTC （tetrazolium chloride emulsion)染色，随机选择不被TTC染色的8个冠状脑区切面，测定大脑半球、皮层和尾状核的缺血面积。 * 3.行为学检测法 意识评价： （0－3级评分） 0: 正常活动；1: 自发活动+/-； 2：触觉刺激不能唤醒; 3：疼痛刺激不能唤醒，无自发活动。（在处死前，以0－3级进行神经行为学的评分） 运动能力评价： （0－3级评分） 0: 未观察到行为缺陷; 1: 前肢弯曲; 2:抵抗侧推力量下降，但无旋转；3: 与2相似，但有旋转。 * 3.行为学检测法 运动功能 斜板法 转轮法 运动轨迹法 引体法 游泳法 * 3.行为学检测法 学习记忆功能 被动回避实验(跳台实验，避暗实验) 主动回避实验(穿梭实验) 迷宫法(水迷宫，多臂迷宫，MORRIS实验) 探索实验(孔板法) * 整体动物脑出血实验模型 脑卒中实验法 自发性易卒中高血压大鼠 脑室自身血注射法 * 组织器官水平研究方法 根据脑缺血引起的组织器官功能变化，研究改善脑组织或其他相关组织功能的药物 扩血管药物 抗血小板抗凝血药物 血栓溶解药 改善组织机能状态的药物 其他(神经细胞保护剂，机体功能调节药等) * 细胞水平研究方法 根据脑缺血的细胞生物学表现，研究抗脑缺血药物或脑损伤保护药物 谷氨酸释放抑制剂 腺苷转运抑制剂 白细胞黏附抑制剂 抗血小板药物 其他(抗凋亡药，GABA增强剂等) * 分子水平研究方法 根据脑缺血的病理机制，研究抗脑缺血药物或脑损伤保护药物 钙通道配基结合实验 自由基清除及抗氧化实验 谷氨酸受体结合实验 PAF受体结合实验等 NO合酶活性实验 其他 * 其他研究方法 根据脑缺血机理研究进展，应用多种方法研究抗脑缺血的药物 分子生物学研究方法 基因组蛋白质组学研究方法 临床研究方法 多学科研究方法 思考题： 1、抗脑缺血药物的主要作用机制是什么？2、举例介绍脑缺血动物模型的制备要求和方法。3、体外研究脑缺血药