饲料生物技术教案chapter 2生物技术在饲料作物育种上的应用.ppt

* 三、植物基因工程育种研究进展与存在的问题 1．植物基因工程育种研究进展 全球转基因作物产业取得了巨大发展，转基因作物播种面积扩大。短短的几年，在国际上抗虫、抗病、抗除草剂的玉米、大豆、棉花、马铃薯、油菜、西红柿等51种转基因品种相继进入商业化生产。 根据国际农业生物技术应用机构统计，1996年度全球转基因作物推广面积170万公顷，2000年增至为4420万公顷。 * 全球转基因农作物主要集中在大豆、玉米、棉花、油莱、马铃薯、西葫芦和木瓜等作物上。1999年在全球转基因农作物种植总播种面积3990万公顷中，转基因大豆占54％，玉米占28%，其次是棉花和籽用油菜各约占9％。 2000年占全球转基因作物种植面积99％的前几个国家中，美国占68％，阿根廷占23％加拿大占7％，中国占1％。 * 2. 植物基因工程育种中存在的问题 植物的基因数量庞大，遗传背景复杂，分离植物目的基因困难。 植物的许多经济性状是数量性状，受微效多基因控制，增加了分离目的基因的难度。 转入的外源基因必须整合到染色体上，还必须能经受住减数分裂的考验而不丢失，才能传给后代。 经典的植物基因工程一般以原生质体为受体，获得目的基因的受体细胞必须能再生成植株。 外源DNA导入的是总DNA，缺乏标记基因，故对导入效果的鉴定难度大。 * 第九节 分子标记在作物育种中的应用 一、用干作物育种研究的分子标记 分子标记是20世纪70年代产生的以DNA多态性为基础的遗传标记，主要应用在分子标记连锁遗传图谱的构建、遗传材料和种质的鉴定和分析、亲本的遗传多样性研究、遗传分析（指纹分析、亲缘关系分析）等方面。 如限制性片段长度多态性（RPLP）、随机扩增多态性DNA（RAPD）、扩增片段长度多态性（AFLP）等。这些标记各具特色，克服了传统遗传标记的缺陷，大大方便了基因水平的操作和分析。 * PCR技术的创建 Kary B. Mullis（穆利斯（美）） Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。 1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术； 1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。 * Kary B. Mullis（1944－） * The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction (Scientific American, 1990, 262(4):56-61, 64-5 ) Primer-directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase (Science,1988,239(4839):487-91 ) Specific Synthesis of DNA In Vitro via a Polymerase Catalyzed Chain Reaction (Methods in Enzymology, 1987,155:335-50 ) * PCR原理 * 生物样品 DNA片段 基因诊断 基因治疗 基因工程产品 法医学检测 人类学研究 …… PCR技术诞生所依赖的社会需求和研究需要 * 基因组DNA 获取特定DNA片段 扩增特定DNA片段 * 限制性内切酶裂解 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 基因组DNA文库 DNA文库 20kB fragments 插入噬菌体载体 细菌扩增 * 裂解变性 显影 从基因组文库中筛选目的基因 probe * DNA克隆 目的基因 载体 复制子 宿主细胞 扩增 扩增 提取DNA分子 * DNA聚合酶 引物 引物 M13噬菌体 Sanger的测序技术 引物 DNA聚合酶 1977年 * 2. RFLP标记 限制性片段长度多态性(RFLP，Restriction Fragment Length Polymorphism) 是目前常用的一种分子标记。 RFLP标记的基本原理是用放射性同位素或非放射性物质标记探针，进行Southern印迹，通过限制性酶切片段的大小，来检测遗传位点的多态性。 是第一代分子生物学标记，可以测定种群内、种群间不同水平的物种差异。呈简单的共显性遗传。 * RFLP法 * 3．RAPD标记 随机扩增多态性DNA（RAPD，Randomly Amplified Polymorphic DNA）是用一系列单随机引物对基因组