【中山大学生物防治】09微生物生产和害虫生物防治课案.pptx

第九章 昆虫病原微生物的增殖和生产;一、苏云金芽孢杆菌的生产;（一）固体发酵;2. 一步扩大培养;（二）深层固体发酵;2. 工艺条件;二、白僵菌的生产;1. 白僵菌液体深层发酵工业;早在1960年代，我国和前苏联就曾研究过白僵菌的液体深层发酵工业生产。 Samsinakova (1966)在1 000 mL的发酵液中可获得10~15 g干重的芽生孢子。 1970年代，前苏联还有通过深层发酵直接生产白僵菌分生孢子的报道（Goral, 1973, 1975），发酵罐中可获得5×108~2×109分生孢子/mL，取决于培养基的成分和发酵条件的控制。 Rombach （1989）进一步研究了白僵菌的深层发酵产孢，发生在产生芽生孢子和菌丝片段的同时也能产生和冲体上或固体培养基上相似的合轴分生孢子。含有2%蔗糖和0.5%酵母浸出物和基础盐培养液中，分生孢子最高产量为1.7×108个/mL；在2.5%蔗糖和2.5%酵母浸出物的培养液中分生孢子最高产量为7.4×108个/mL。;1970年代初开始，前苏联采用双相发酵技术生产球孢白僵菌，该技术是将经深层培养的芽生孢子液倾入有麦麸、谷类等培养基的浅盘表面上，促进菌丝迅速发育，并产生分生孢子。白僵菌的分生孢子制剂，其产品名称为Beauverin或Bocerin，含活孢子量2×109个/g，惰性基质为高岭土（Goral, 1971, 1972）。此法生产白僵菌的培养基含玉米浸膏2%、糖蜜4%~6%、KH2SO4 0.1%~0.2%、MgSO4 0.05%~0.1%，pH 5~6。无菌操作工业化深层通气发酵24~28 h，倾入浅盘表层培养约120 h，从表层菌膜收获分生孢子，产孢量为1×106~1.5×106个/cm2。 我国各生产单位自1980年代也曾普遍使用该技术大量生产白僵菌。中国农业科学院生物防治研究室研究的工艺可获孢子量1.5×1010~2.0×1010个/g，经分离提纯，含孢量高达1.0×1011~1.9×1011个/g。 使用该技术生产过程中，需注意防止菌种退化、选择培养基、控制培养条件、防止污染等环节。;三、斜纹夜蛾多角体病毒的增殖;1. 斜纹夜蛾健虫的饲养;卵的孵化：在幼虫孵化前一天，用5%（v/v）福尔马林溶液将卵块浸泡20~30 min，无菌水漂洗3次，灭菌纸上晾干，移入盛有人工半合成饲料的圆形塑料盒盖子的中央，每盒接卵2~3块。 放置于25oC孵育，RH 75%左右，每天光照12 h。;低龄（1~3龄）幼虫的饲养：将约500粒已消毒的卵接入盛有饲料的中央，等孵化完毕后，将盒子倒置饲养。不同添加饲料和更换饲养容器。 老龄（4~6龄）幼虫的饲养：幼虫养至4龄后，更换到规格18 cm × 18 cm × 4.5 cm的方形塑料盒或直径19.5 cm、高9 cm的圆形玻璃缸中继续饲养。一般4龄幼虫投放密度为18头/dm3，5龄为12头/dm3 ，6龄为9头/dm3。由于4~6龄幼虫每次蜕皮都会吐水，造成容器内湿度过大，影响生长发育，这是期的相对湿度应降至60%。 温、光、湿（特别说明的除外）条件与卵孵化相同。;蛹的管理：在规格为15 cm × 25 cm × 30 cm有塑料纱盖（已消毒）的木盒中，放入10 cm厚已高温消毒的沙子，沙的含水量以手捏不成团为宜。同时在沙上放一块竹网，竹网上投放人工半合成饲料。当老熟幼虫全部入沙营造蛹室时，取走竹网，在沙上盖纸避光。每盒子可供45头幼虫化蛹，待蛹体变成黑色后，挑选个体大、富有光泽、有活力的蛹，放入交配产卵箱羽化。温、光、湿条件与卵孵化相同。;成虫：将蛹放入垫有湿滤纸的培养皿中，移入30 cm × 30 cm × 30 cm的纱网养虫笼内，每笼放入15对蛹。待羽化后，在笼内瓶插2~3片蓖麻叶，让成虫产卵。并放入10%蜜糖水，以供成虫营养。每天收取卵块，要按笼号分批登记，以便进行疾病的诊断。温度调至28oC，光、湿条件与卵孵化相同。;2. 幼虫感染与回收;3. 病毒提取干燥;4. 可湿性粉剂的配置;斜纹夜蛾核型多角体病毒制剂生产工艺流程总结;四、昆虫病原线虫的繁殖与培养;1. 共生细菌的制备;菌株：斯氏线虫和异小杆线虫与共生细菌具有一定程度的营养专化性，即线虫从自身携带的共生细菌中获得最佳营养，但线虫在不同菌株中的生长率和产量不同，有些线虫（如格氏斯氏线虫和一些异小杆线虫品系）能在其他共生菌株得到比自身携带的共生细菌更高的产卵。不同的菌株对不同培养基组分的转化能力不同，因此，有必要根据线虫品系和培养基组分选择最优的菌株用于线虫的繁殖。;2. 线虫的大量培养;2. 线虫的大量培养;3. 线虫的收获与清洗;4. 线虫的质量检测;5. 线虫的储存于剂型;五、蝗虫微孢子虫的繁殖;蝗虫微孢子虫生产仍然使用活体寄主繁殖，目前使用的活体寄主是蝗虫。 不同国家