食品生物技术导论第3章.ppt

第三章细胞工程与食品产业 第一节 概述 第二节 细胞培养技术 第一节 概述 1.细胞工程也叫细胞技术，是生物技术的主要内容之一。 2.基础知识 细胞是细胞工程操作的主要对象，细胞是生物体结构和功能的基本单位。 生物界有两大类细胞：原核细胞和真核细胞 细菌、放线菌等属于原核细胞，细胞小，DNA裸露于细胞质中，不与蛋白质结合，胞内无膜系构造的细胞器，胞外由肽聚糖组成细胞壁。它是细胞融合的主要障碍；不过原核细胞生长迅速，无蛋白质结合的DNA易于进行遗传操作，因此它们又是细胞改造的良好材料。 酵母、动植物等属于真核细胞，体积较大，内有细胞核和众多膜系构造细胞器。植物细胞外还有数层以纤维素为主要成分的细胞壁。真核细胞一般都有明显细胞周期，处于有丝分裂时期的染色体呈现高度螺旋紧缩状态，既不利于基因外钓，也不利于外源基因的插入。因此采取一定的措施诱导真核细胞同步化生长，对于成功的进行细胞融合及细胞代谢产物的生产具有十分重要的作用。 细胞分化和细胞全能性 细胞分化：个体细胞发育过程中，后代细胞在形态、结构和生理功能上发生差异的过程。 在对多细胞生物中，大多以结合成组织或器官的形式存在，因而细胞的形状一般与其存在的部位和行使的功能有关。在单细胞生物中，虽然没有像多细胞那种典型的细胞分化过程，但是在其生活周期中细胞也表现出有规律的形态结构和生理功能上的阶段变化，这种变化也有细胞分化的性质。 一般来说，体内各种细胞均含有物种的全部基因。但是在细胞中只有一少部分基因在活动。 这些表达的基因可分为两类：一是维持细胞生存所必需，称为持家基因；另一类是在各种细胞中专一选择表达的，称为组织专一基因，其表达合成了组织专一的蛋白产物。 在具有全能性的胚胎细胞和多功能干细胞水平上，细胞间没有表现出形态上的差异。可是这些细胞经过多次分裂，所产生的子细胞却限定向一定方向发育。 细胞分化能力的强弱称为发育潜能，细胞具有发育成完整个体的潜能称为细胞全能性。 但是随着胚胎的发育，有的体细胞虽然具有分化出多种组织的潜能，但是失去了发育成完整个体的潜能，细胞具有的这种发育潜能叫多能性，也就是说，在发育过程中细胞的发育潜能逐渐变窄。 通常情况下，分化细胞的表型要保持稳定，以执行特定的功能。然而在某些条件下，分化细胞也不稳定，其基因活动模式会发生可逆的变化，又回到未分化的状态，这一过程称为去分化。例如如，在培养条件下的植物愈伤组织，它具有全能性，可再生出完整的植株。 在发育潜能上植物细胞不同于动物细胞。高度分化的植物营养组织仍保持着发育成为完整植株的能力，也就是具有全能性。 高等动物在发育过程中，产生了体细胞与生殖细胞两个独立的细胞系。动物细胞的分化潜能随分化程度的提高而逐渐变窄。而对于细胞核而言，高度分化的细胞仍保留着物种的全套基因。 动物细胞核移植实验表明，不仅分化的胚胎细胞的核具有指导卵质杂交体发育为成熟个体的全能性，而且高度分化的体细胞的核也具有全能性。也就是说，分化细胞中不表达的基因仍然存在，保持着重新启动表达的潜能，体细胞克隆技术充分证明了这一点。 细胞的这种发育的全能性或潜能症是细胞工程中细胞与组织培养、克隆等技术的理论基础。 1.2细胞工程的基本操作 无菌操作技术 细胞工程的所有实验都要求在无菌的条件下进行，稍有疏忽都可能导致试验的失败。 实验操作应在无菌室内进行，无菌室应定期用紫外线或化学试剂消毒，实验前后也应消毒。 无菌室外应有缓冲室，实验人员在此换鞋、更衣、带帽，做好准备后进入无菌室。 超净工作台是基本实验设备，所有的操作都应在超净工作台上进行。 其次对生物材料进行彻底的消毒和除菌是实验成功的前提，实验所用一切器械、器皿和药品都应进行灭菌，实验者双手应戴无菌手套。 细胞培养技术 细胞培养是指动物、植物和微生物细胞在体外无菌条件下的保存和生长。 虽然这些细胞培养在营养要求等方面有很多差异，但它们也有共同之处： 首先，要取材和除菌； 其次，根据各类细胞的特点，配制细胞培养基对培养基进行灭菌或除菌； 最后将接种后的培养基放入培养室或培养箱中，提供各种细胞生长所需的最佳培养条件。当细胞达到一定生物量时及时收获或传代。 细胞融合技术 两个或多个细胞互相接触后，其细胞膜发生分子重排，导致细胞合并、染色体等遗传物质重组的过程称为细胞融合。 细胞融合是细胞工程的重要基本技术，其主要过程包括： ①制备原生质体，有细胞壁的细胞需用酶或其他方法去壁； ②诱导细胞融合； ③筛选杂合细胞，一般用选择性培养基筛选。 2.细胞培养技术 根据所培养的细胞对象不同，细胞培养可以分为微生物细胞、植物细胞、动物细胞的培养。相对于微生物细胞而言，动植物细胞要“娇贵”得多，因此动植物细胞培养要求更高，操作复杂而精细，是细胞培养研究的重点。 细胞培养常被泛称为组织培养，它实际上包括了三个不同层次