Bim-1基因在胃癌中的表达及其临床意义.docVIP

　　Bim?1基因在胃癌中的表达及其临床意义 【摘要】 目的： 探讨Bim?1基因在胃腺癌细胞株、胃癌组织和癌旁组织以及胃癌患者外周血中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法: 收集80例胃癌患者的癌组织和癌旁组织,培养胃腺癌细胞株(SGC?7901,BGC?823,AGS),采用RT?PCR和实时PCR的方法检测Bmi?1基因的表达情况。另外同时收集Bim?1基因阳性胃癌患者外周血标本以及健康体检者外周血标本各20例,用淋巴细胞分离液(Ficoll)分离获得单个核细胞,采用巢式PCR和实时PCR的方法检测其Bmi?1基因的表达情况。采用蛋白质印迹法验证胃癌组织和对应的癌旁组织以及胃癌患者及健康体检者血单个核细胞中Bim?1蛋白的表达情况。 结果: 胃腺癌细胞株(SGC?7901,BGC?823,AGS)中Bim?1均高表达;胃癌组织中Bim?1表达(85%)明显高于癌旁组织(30%)(Plt;0.05);胃癌患者外周血单个核细胞Bim?1基因的阳性率为60%,显著高于健康体检者(Plt;0.05)。胃癌组织和癌旁组织中Bim?1的蛋白水平存在差异,而在外周血中未见明显差异。结论: Bim?1基因在胃腺癌细胞株以及胃癌组织中高表达,胃癌患者外周血单个核细胞Bim?1的阳性率高于健康体检者,通过检测Bim?1基因可为胃癌的临床诊断及其靶向治疗提供新途径。 【关键词】 Bim?1基因; 胃癌; RT?PCR; 实时PCR Expression and significance of the Bim?1 gene in gastric carcinoma 　　QI edical Science and Laboratory Medicine,Jiangsu University, Zhenjiang Jiangsu 212013, China) 　　[Abstract] Objective: To detect the expression of Bim?1 gene in gastric carcinoma, adjacent non?cancerous tissues and the peripheral blood of the corresponding gastric carcinoma patient,to explore a. Methods: The expression of Bim?1 gene erase chain reaction(RT?PCR) and real?time PCR in gastric carcinoma,and adjacent non?cancerous tissues from 80 patients and the gastric carcinoma cell strain(SGC?7901,BGC?823,AGS). Furthermore, e time the expression of Bim?1 gene in the peripheral blood of both 20 corresponding gastric carcinoma patients and health people.Using real?time PCR and nested RT?PCR detected the expression of Bim?1 gene in the peripheral blood. EM基础培养基,37 ℃在5%的CO2培养箱中培养,每3天换液1次,每6～7天传代1次,显微镜下观察细胞生长状况。收集1 ml悬浮细胞离心5 min(800g),用PBS冲洗3次。加入1 ml Trizol,吹打混匀,室温消化15 min,装入1.5 ml 的不含RNA酶Eppendorff管中,-70 ℃保存备用。 (责任编辑：编辑04) 　　1.4 组织单个细胞制备 　　将100 mg胃癌及癌旁组织置于无RNA酶的组织研磨器中的铜网上,加入1 ml含0.1% DEPC 的PBS,使用一次性塑料研棒将组织研磨成单个细胞,转入1.5 ml 的不含RNA酶的Eppendorff管中,1 000g离心5 min,弃上清,用1 ml含0.1% DEPC 的PBS洗两遍,离心,加入1 ml Trizol,吹打混匀,室温消化20 min,装入1.5 ml 的不含RNA酶的Eppendorff管中,用作RNA提取;-70 ℃保存备用。 　　1.5 总RNA提取 　　用Trizol试剂提取胃癌及癌旁组织的总RNA,每份加入200mu;l 冰冷的氯仿,反应10 min,4 ℃ 12 000g离心10 min,吸取上清液至另一1.5 ml 不含RNA酶的Eppendorff管中,加入600 mu;l