HPLCFLD法测定丹参素在家兔组织中的分布论文.docVIP

　　HPLCFLD法测定丹参素在家兔组织中的分布论文 胡珊珊 刘洁 刘少静 房敏峰 王世祥 孙文基 郑晓晖 【摘要】 目的：建立高效液相色谱荧光检测（HPLCFLD）分析方法，测定丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中的含量. 方法：家兔经丹参药材水提液灌胃后，其重要脏器的匀浆液以100 mL/L高氯酸沉淀，上清液乙酸乙酯萃取. 以4羟基苯甲酸为内标，测定丹参中丹参素在组织中的含量. 结果：HPLCFLD法的检测限为0.01 μg/mL，线性范围为0.05～200.00 μg/mL；丹参中丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑组织中的含量顺序为c肾 c肝 c心 c肺 c脑 c脾. 结论：建立的HPLCFLD检测法具有特异性强，灵敏度高和定量准确等特点，可为其他样品中丹参素的测定提供参考. 【关键词】 丹参素；高效液相色谱荧光检测法；组织分布 【Abstract】 AIM: To detection of danshensu levels in rabbit tissues, one of the bioactive pounds in Salvia miltiorrhizae by high performance liquid chromatographyfluorescence detection method (HPLCFLD). METHODS: Tissue samples of rabbits L/L) acid after oral administration of Salvia miltiorrhizae. The resulting supernatant ined it of the method L, and the linear range L. The characteristic profile of Danshensu in different tissues ethod is specific, sensitive and accurate, so it could be used for analysis of Danshensu in other biological samples. 【Keyance liquid chromatographyuleraviolet detection, HPLCUV）. 然而，HPLCUV法与荧光检测法相比较，存在灵敏度低和特异性较差等缺点，虽然质谱法可用于生物样品中丹参素的分析，但由于该仪器设备比较昂贵而不易被利用和普及. 本研究建立高效液相色谱荧光检测（high performance liquid chromatographyfluorescence detection, HPLCFLD）法，用HPLCUV和HPLCFLD两种方法测定家兔灌服丹参水提物后，其主要脏器组织中丹参素的含量，为丹参药材中丹参素在其他生物体液中的含量测定提供方法. 1 材料和方法 1.1 材料 健康家兔12只，雌雄兼用，体质量1.8～2.5 kg（动物合格证号：医动字08018，西安交通大学医学院实验动物中心）；1100型高效液相色谱仪（配有荧光检测器，紫外全波长扫描二极管阵列检测器，美国安捷伦公司）；BP221s型电子天平（德国赛多利斯公司）；TGL16G型离心机（上海安亭科学仪器厂）；丹参药材（经陕西省药品检定所鉴定，西安药材公司）. 对照品：丹参素(批号110855200504，中国药品生物制品检定所)；4羟基苯甲酸（化学纯，批号920728，北京化工厂）. 甲醇(色谱纯，美国费希尔公司)；高氯酸、乙酸乙酯、甲酸（均为分析纯，天津化学试剂二厂）. 1.2 方法 1.2.1 丹参药材供试品溶液的制备 取丹参药材粉碎干燥至恒重. 精密称取丹参150 g，以8倍量水浸泡30 min，加热回流提取2次，每次1.5 h，合并提取液，抽滤，滤液减压浓缩至75 mL，4℃冷藏备用. 1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参素对照品5.0 mg，用甲醇定容于10 mL容量瓶中，制备成0.50 mg/mL的丹参素对照品溶液. 同法制备0.91 mg/mL的4羟基苯甲酸供试品溶液（内标溶液）. 1.2.3 含药组织供试品溶液的制备 随机抽取健康家兔6只，按10 g/kg丹参生药量灌胃，于给药后50 min处死，迅速摘取心、肝、脾、肺、肾、脑，液氮冷冻. 解冻后，分别精密称取脾0.8 g，心2.0 g，肝、肺、肾和脑均为4.0 g，于脾中加入1.2 mL生理盐水，于心中加入3.0 mL生理盐水，于肝、肺、肾和脑中各加入6.0 mL生理盐水，冰浴下匀浆. 匀浆液于2146.56 g离心10 min，取上清