Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响论文.docVIP

　　Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响论文 【摘要】 探讨Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响。方法 采用MTT法检测Genistein单用及合用顺铂对细胞增殖的影响，流式细胞仪分析Genistein及Genistein联合顺铂对细胞周期和凋亡的影响。结果 Genistein对SKOV3细胞增殖表现出浓度依赖性的抑制作用，并显著提高了其对顺铂的敏感性（P 0.05）；0.625～5μg/ml顺铂与2.5～10μg/ml Genistein合用基本表现为协同作用。5、10μg/ml Genistein均可将细胞阻滞于G2/M期并诱导一定程度的凋亡，10μg/ml Genistein还可进一步的干扰S期进程；当顺铂与Genistein合用时，两种药物在干扰SKOV3细胞周期和诱导凋亡方面表现为显著的协同效应。结论 Genistein能够抑制耐药卵巢癌细胞SKOV3的增殖，并显著增强该细胞对顺铂的敏感性。 【关键词】 Genistein 顺铂 卵巢癌 耐药 0 引言 肿瘤耐药是卵巢癌患者生存率低的重要原因，因此迫切需要新型有效的化疗方案。Genistein（又称染料木黄酮）是一种有潜力的化疗增敏剂，广泛存在于大豆和多种中草药中.freela，Genistein用DMSO配成储备液（10mg/ ml），20℃保存；顺铂（齐鲁制药厂）；噻唑蓝(MTT)购自Amresco。细胞周期试剂盒为DNAPrep Stain kit(BECKMANCOULTER)；Annexin VFITC/PI凋亡试剂盒为Apoptosis Detection Kit(Biovision)。全自动酶标仪为K3型(Labsystems Dragon)；流式细胞仪为ELITE ESP型（BECKMANCOULTER）。 1.2 方法 1.2.1 顺铂、Genistein单药对SKOV3细胞增殖的影响 收集对数生长期细胞，8×103个/孔接种于96孔培养板，37℃、50ml/L CO2孵箱培养12h，细胞贴壁后弃去培养液，加入含不同浓度药物的培养基200μl，顺铂组浓度为0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml，Genistein组浓度为2.5、5、10、20、40、80μg/ml， 为评估DMSO对实验的影响，设6个DMSO组（浓度与Genistein各组DMSO含量一致），同时设对照组，每组设6个复孔。继续培养72h，每孔加入MTT(5mg/ml，20μl),继续孵育4h后弃培养液，每孔加入DMSO150μl，振荡10min，酶标仪测吸光度(A490)，按以下公式计算：细胞增殖抑制率=（对照组A490值实验组A490值）/对照组A490值× 100%，取6孔均值绘制浓度效应曲线。 1.2.2 顺铂联合Genistein对SKOV3细胞增殖的影响 方法基本同前。顺铂选0.625、1.25、2.5、5μg/ml 4个浓度; Genistein选2.5、5、10、20、40μg/ml 5个浓度，设对照、单药、联合共30种组合。用以下公式计算两药的相互作用: q=E(AB)/EA+EBEA×EB。其中E(AB)为两药合用的抑制率，EA和EB为各药单用的抑制率，q 1.15为协同作用，0.85 1.2.3 顺铂、Genistein单药及联合对周期和凋亡的影响 根据MTT结果，顺铂浓度选2.5μg/ml, Genistein选5.0、10.0μg/ml，设对照、单药和联合共6组。加药48h后收集细胞，分别按DNAPrep Stain Kit试剂盒和Apoptosis Detection Kit试剂盒说明书进行细胞固定、染色，上流式细胞仪分析。 1.3 统计方法 采用SPSS10.0进行统计学处理。 2 结果 2.1 顺铂、Genistein单药对SKOV3细胞增殖的影响 顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制作用随浓度的增加呈平缓的增强趋势，当浓度达10μg/ml以上时，顺铂对增殖的抑制率才急剧上升，并在20μg/ml时达到51.6%，见图1，与对照组相比差异显著(P 0.05)。而顺铂在2.5μg/ml浓度以下时，对SKOV3细胞增殖的抑制作用与对照组无显著差异(P 0.05)。 Genistein对SKOV3细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性，5μg/ml以上的各组与对照组差异显著(P 0.01)，当Genistein浓度达40μg/ml后，抑制率急剧上升，80μg/ml Genistein的抑制率达到96.9%。而用于溶解Genistein的DMSO对SKOV3细胞增殖并无明显影响(P=0. 398)，见图2。