IL┐2促进C6胶质瘤细胞增殖及IL┐2R在该细胞的表达论文.docVIP

　　IL┐2促进C6胶质瘤细胞增殖及IL┐2R在该细胞的表达论文 .freelRNA水平观察白细胞介素-2受体（IL-2R）α，β，γ3条链在C6神经胶质瘤细胞中的表达.方法应用细胞培养、MTT法、3H-TdR掺入法、免疫细胞化学方法和RT-PCR技术.结果①IL-2（1×104～1×106U L-1）可显著促进C6细胞的增殖;②C6细胞中检测到IL-2R的β、γ2条链的免疫反应阳性物质;③IL-2Rβ，γmRNA在C6细胞中均有表达.结论IL-2可显著促进C6神经胶质瘤细胞的增殖，C6细胞表达IL-2Rβ、γ2条链的蛋白与mRNA，可能介导IL-2增殖信号的传递.freela;celldivision;receptorsin-terleukin-2;signaltransduction Abstract:AIMToinvestigatetheeffectsofinterleukin-2（IL-2）ontheproliferationofC6gliomacelllineandtheex-pressionsofα，β，γchainsofinterleukin-2receptor（IL-2R）inthecelllineatproteinandmRNAlevels.METHODSTechniquesusedinthisexperimentincludedcellculture，MTT，3H-TdRincorporation，immunocytochemistryandRT-PCR.RESULTS①IL-2significantlyincreasedtheprolifer-ationratesofC6cells;②IL-2Rβ，γ-immunoreactiveproduc-tionRNAulatetheproliferationofC6cellline，alsotheproteinandmRNAofIL-2Rβ，γcanprovidemoreevidenceforthedirectactionofIL-2ingliomacellsandfurtherdisclosethecytokin’sroleinthecen-tralnervoussystem. 0引言 白细胞介素-2（IL-2）是T细胞产生的一种免疫因子.神经免疫内分泌调节网络研究的多项结果显示IL-2是该网络共享信息分子.IL-2对神经系统功能具有重要的调节作用.星形胶质细胞是中枢神经系统中数量最多的一种细胞，对维持神经系统的功能发挥至关重要的作用，以往研究表明IL-2能够影响其他胶质细胞的增殖活动［1］.IL-2对靶细胞的作用通过IL-2受体（IL-2R）蛋白介导.IL-2R由α，β，γ3条链组成［2］，其中β，γ两条链是介导IL-2信号转导尤其是增殖信号转导的关键环节［3，4］.IL-2R在神经系统中有广泛表达［5］.本实验旨在初步探讨IL-2对星形胶质瘤细胞增殖的影响并从蛋白和基因水平研究IL-2R在C6胶质瘤的表达状况. 1材料和方法 1.1材料C6大鼠神经胶质瘤细胞系（第四军医大学病理学教研室），DMEM培养基、Trizol（Gibco），新生小牛血清（Hyclone），EDTA，MTT（华美公司），兔抗大鼠IL-2Rα，β，γ抗体（SantaCruz），ABC试剂盒、DAB（Sigma），反转录试剂盒、PCR反应试剂盒（Promega），PCR扩增仪（Jencons），3H-TdR（上海原子核研究所），LS-6500液闪计数仪（Beckman），ZT-Ⅲ型细胞收集仪（绍兴卫星机械公司）. 1.2C6细胞培养细胞培养于含100mL L-1小牛血清的DMEM培养基中，置于50mL L-1CO2，37℃孵箱中.传代时以0.2g L-1EDTA消化3～5min，离心（1000r min-1，5min），培养液悬浮，接种于培养瓶. 1.3MTT法以2×108～5×108 L-1细胞数接种细胞于96孔培养板，共分4组（每组5孔），孵箱中培养24h后，换为无血清培养基培养，再向每组分别加入1×103，1×104，1×105，1×106U L-1的IL-2，空白对照组仅加无血清培养液，孵箱中培养48h后，每孔加入5g L-1MTT20μL继续培养4h，弃去孔内培养液，每孔加入150μLDMSO，轻轻振荡10min，用酶联免疫分析仪测A490nm值. 1.43H┐TdR掺入法细胞接种与加IL-2处理步骤同MTT法，加IL-28h后，每孔加入3.7×104Bq3H-TdR继续培养40h，细胞收集仪收集细胞于玻璃纤维滤纸上，烘干，移入加有500μL闪烁液的测量瓶内，液闪计数仪进行掺入量测定，其值以Bq表示. 1.5免疫细