PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞分化论文.docVIP

　　PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞分化论文 【摘要】 目的 探讨卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）联合钙离子载体（CI）诱导K562细胞向树突状细胞（DC）分化的作用。方法 对数生长期的K562细胞在含PMA和CI的培养液中培养96 h后，倒置相差显微镜下观察细胞形态，用流式细胞仪检测细胞表型，用MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖的能力。 结果 PMA联合CI组细胞形态发生明显变化，表面出现许多细小的突起，细胞表面CD83、CD86、CD80、CD40、HLADR和CD1a表达上调，并且可以刺激淋巴细胞的增殖反应。 结论 PMA联合CI可以有效地使K562细胞向DC分化。 【关键词】 K562细胞 树突细胞 十四酰佛波乙酯 钙通道 离子载体 ABSTRACT: Objective To explore the effect of PMA (phorbol myristate acetate) and calcium ionophore (CI) in inducing the differentiation of leukemia cell line K562 into activated dendritic cells (DC). Methods K562 cells on medium containing CI (A23187) and PMA for 96 h. The cell morphology icroscope and the electronic microscope. The viability rate of K562 cells cultured in each group ined by the trypan blue staining. The immunologic phenotypes etry. The proliferation reaction of lymphocyte cells etry. Results After 96 h treatment l) and PMA (10 μg/mL), the cells exhibited the characteristic DC morphology, CD83, CD86, CD80, CD40 and HLADR, CD1a expression ulate the proliferation of allogeneic T cells . Conclusion CI in bination channels; ionophores 福建医科大学学报 2008年7月 第42卷第4期曾晓明等：PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞分化树突状细胞（DC）是体内最强的抗原提呈细胞（APC），来源于髓系祖细胞。在白血病的细胞中.freelyristate acetate，PMA)联合钙离子载体（calcium ionorphore，CI）诱导K562细胞向DC分化的作用,探讨运用细胞株进行抗白血病免疫治疗的可行性。 1 材料与方法 1.1 材料 K562细胞株由福建医科大学药理学研究所馈赠。CI（A23187）、PMA为Sigma公司产品。RPMI 1640干粉为美国Gibco公司产品。胎牛血清(FCS)为杭州四季青生物制品公司产品。异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗HLADR、CD80单抗，PE标记的抗CD86，CD83，CD40和CD1a单抗及同亚型对照抗体（鼠抗人），均为美国eBioscience公司产品。丝裂霉素C为上海Roche公司产品。6孔培养板、96孔培养板均为Coasta公司产品。L谷氨酰胺、MTT及台盼蓝制剂为厦门泰京生物工程有限公司产品，人淋巴细胞分离液为天津市灏洋生物制品科技有限责任公司产品。 1.2 方法 1.2.1 K562细胞培养及形态观察 （1）取对数生长期的K562细胞，以完全RPMI 1640培养基（加入10％FCS，10 mmol/L L谷氨酰胺）悬浮，以1×106 mL-1接种于6孔板中，每孔2 mL，分4组。PMA+CI组：加入PMA和CI,使PMA最终浓度为10 ng/mL，CI最终浓度为 375 ng/mL；PMA组：只加入PMA，PMA最终浓度为 10 ng/mL；CI组：只加入CI，CI最终浓度为375 ng/mL；对照组：只加培养基。每组细胞为一板（n=6），37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养，隔天半液换量。实验组（包括PMA+CI组、PMA组及CI组）另外加入半量新鲜试剂，对照组只补充新鲜培养基。培养96 h后收获细胞。（2）形态观察。收获4组细胞，在倒置显微镜下观察细胞形态。（3）细胞活率测定。收获各实验组的K562细胞，按