高温对体外培养海马神经元细胞影响及细胞凋亡机制探究.docVIP

高温对体外培养海马神经元细胞影响及细胞凋亡机制探究 　　[摘 要] 目的：研究不同温度对体外培养海马神经元细胞的影响及其机制。方法：取出生1～3天的SD幼鼠海马神经细胞体外培养，分为37℃和42℃2组，分别孵育12h和24h。利用CCK8、TUNEL分析、Western blot等技术，观察12h和24h时海马神经细胞存活率及凋亡细胞数，以及Bcl-2、Bax和cleaved-caspase3蛋白表达。结果：与37℃组相比、42℃组海马神经元细胞存活率下降，凋亡阳性细胞数明显增加，并随着时间延长凋亡阳性细胞数增多。42℃组中，神经元细胞Bcl-2表达减弱，Bax、cleaved-caspase3表达增强，上述指标与37℃组同时点比较，差异均有统计学意义（P 　　3 讨论 在一定条件下，高温对人体的损害是不可逆转的，而这些不可逆的损害有可能是通过细胞凋亡实现的[4]。细胞凋亡又称为程序化细胞死亡，是细胞生物有机体为调控机体发育，维持内环境稳定，由基因控制的细胞主动性死亡过程[5]。高温诱发细胞凋亡的发生机制，一方面是直接影响细胞结构，另一方面与某些基因异常表达有关 高温诱导机体细胞损伤程度与热的程度相关，极度高温（49℃～50℃以上）可导致细胞在5min内以坏死方式死亡，而当环境温度在 41.6℃～42℃时，细胞死亡方式以凋亡为主[6]。本实验从细胞形态和相关蛋白变化，观察温度对海马神经细胞的影响。光镜下可见高温改变了神经细胞结构，其中细胞核的改变最具特征性。CCK8、TUNEL结果表明，高温可降低神经细胞存活率，加快凋亡，且温度越高细胞存活率越低，凋亡率越高。随着时间延长，细胞存活率明显下降，细胞凋亡数增多。陈光忠等[7]研究显示，高温处理的大鼠海马锥体细胞，凋亡率增加，且温度越高、时间越长凋亡率越高，结论与本实验结果一致。近年研究显示PI3K/Akt信号转导途径在细胞的存活、增殖、凋亡以及细胞骨架变化等[8]活动中发挥重要的生物学功能，其机制可能包括：①调节Bcl-2家族成员的活性；②抑制caspase家族导致的细胞凋亡；③活化的Akt抑制GSK-3活性，加速凋亡；④活化的Akt抑制线粒体释放如细胞色素C、AIF等凋亡相关因子，抑制凋亡；⑤活化转录因子NF-κB促进细胞增殖，抑制细胞凋亡等 Bcl-2蛋白家族有抑制细胞凋亡基因（Bcl-2，Bcl-xl等），有促进细胞凋亡基因（Bax，Bad等）[9-10]。凋亡的各种信号转导途径有一个共同的通路或交汇点，而该通路或交汇点受Bcl-2调节。Bcl-2通过干扰细胞色素C自线粒体的释放，阻断caspase蛋白酶连锁反应的激活，进而抑制细胞凋亡[11] Caspase家族是细胞凋亡下游关键酶，caspase3是该家族中细胞凋亡的主要效应因子， 与其他的caspases以级联反应方式， 主要作用在细胞凋亡的执行阶段，是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶[12-13]。本研究采用Western blot检测蛋白Bax、Bcl-2及cleaved-caspase3的表达情况，结果显示高温能干扰这些蛋白的表达，随着温度升高，Bax、cleaved-caspase3表达增加，Bcl-2表达降低，随着时间延长变化更为明显。表明Bcl-2有保护细胞免受凋亡的作用。Strasser等[14]报道，Bc1-2基因表达可以使热诱导的细胞凋亡下降，并促使细胞继续增殖，形成热耐受。崔宝林[15]等报道，热疗可显著抑制 Bcl-2通路，促进细胞凋亡，与本实验结果相符。随着加热时间延长cleaved-caspase3活性变化与细胞凋亡趋势一致，说明caspase3参与了高温诱导的海马神经细胞凋亡；Lecchi C等[16]发现，随着温度升高，活化后的caspase3表达逐渐增强，其表达趋势与神经元细胞凋亡一致。朱晔晶等[17]报道，热处理人ECV304 后，caspase3随着时间的增加其活性变化与细胞凋亡趋势一致，与本实验结论相符 综上所述，高温可诱导海马神经细胞凋亡，随着温度的升高及时间的延长，细胞凋亡数增加。Bcl-2、Bax、caspase 3蛋白是PI3K/Akt信号转导途径中调节蛋白，可能是通过PI3K/Akt信号转导途径诱导神经元细胞凋亡，Akt是该传导通路的下游靶激酶，可进一步观察Akt等相关蛋白明?_其在海马神经元细胞损伤中的作用 参 考 文 献 [1] TANG Y M， WANG D G， LI J， et al. Relationships between micronutrient losses in sweat and blood pressure among heat-exposed steelworkers[J]. Industrial Heal