2二期临床试验论文.doc

基于母血浆DNA的胎儿染色体非整倍体疾病非侵入性大规模平行测序研究： 针对中国孕妇群体的前瞻性临床研究 Yijun Song M.D., Ph.D.1, Congcong Liu M.D.2, Hong Qi M.D., Ph.D.2, Yunping Zhang M.D.2, Xuming Bian M.D.1, and Juntao Liu M.D., Ph.D.1* 1 中国协和医科大学 北京协和医院妇产科，北京，100730 2 海淀区妇幼保健院妇产科，北京，100080 *通讯作者：刘俊涛，中国协和医科大学 北京协和医院妇产科，北京市东城区校尉胡同王府井帅府园1号电话：010 邮箱：tao_aus@ 项目资金声明：本研究由“十一五”国家重点科技和发展项目基金资助（2006BAI05A10） 摘要： 目的：基于母血浆游离DNA的大规模平行测序技术（non-invasive prenatal test, NIPT）在以往的研究中已经被证实可作为一种新型的产前筛查方法加以运用。但是之前的研究主要集中于高风险和高龄人群，尚缺乏低龄人群（35岁）中的研究结果。本文的研究目的便是在中国低龄孕妇群体（35岁）中开展NIPT针对染色体非整倍体疾病的前瞻性研究。 方法：利用大规模平行测序的方法检测母血浆DNA。检测结果需与血清学筛查结果对照，且通过核型分析和产后随访验证。 结果：本研究共收集1916例门诊随机样本，其中73例（3.8%）样本未通过测序前的质控，111例（5.8%）样本未有妊娠结局随访结果，最终可用于分析的有效样本数为1741例。本次研究NIPT共发现15例染色体非整倍体样本，包含T21、T18和T13。在性染色体非整倍体检测方面，NIPT检出4例异常中的2例，特异性99.88%。 结论：与中孕期血清学筛查相比，NIPT具有很高的灵敏度和特异性，同时还具有很低的假阳性率，可以在低龄孕妇（35岁）中用。 关键词：染色体非整倍体，cffDNA，NIPT，大规模平行测序 背景介绍： 染色体非整倍体疾病是一类主要的遗传性疾病。新生儿中最为常见的染色体非整倍体疾病为21三体综合征（唐氏综合征，T21）、18三体综合征（爱德华氏综合征，T18）、13三体综合征（帕陶氏氏综合征，T13）和性染色体非整倍体疾病。有数据显示，T21的发病率为1/80011，发病率随孕妇年龄的增加而增加，当孕妇年龄达到45岁，T21的发病率增加到1/3523,29。T18和T13各自的发病率为1/6000和1/1000017，性染色体非整倍体疾病在新生儿中的发病率约为1/50024。 近几年，用于染色体非整倍体疾病的产前检测方法取得了长足进步。基于孕妇年龄的血清学三联筛查更是发展迅速，对于T21的检出率已达到70%1。胎儿颈项透明带（NT）的配合应用更可显著提高染色体非整倍体疾病的检测灵敏度。研究发现，早孕期和中孕期的血清学筛查联合运用，T21的检出率可达到80%21，若进一步结合NT，T21的检出率可高达96%21。不过，血清学筛查假阳性率约为5%，且筛查人群大时工作量巨大，也仅适用于T21或T18，对于其他染色体非整倍体不能取得T21或T18类似的检测效力。 基于母血浆游离DNA的NIPT检测技术开启了产前筛查的新时代。最初的研究主要集中在NIPT对于T21的检测效力上9,14，随后扩展至对于T18和T13的检测6,30,32。一系列的临床研究证实NIPT对于T21、T18的检测灵敏度可达到99%以上，T13的检测灵敏度介于78.6%与91.7%之，假阳性率低于1%4,5,8,10,12,25-28,31,34，但对于性染色体非整倍体的NIPT检测很少报道，其中一项研究取得了93.8%的检测灵敏度4。 不过上述NIPT的研究主要集中于高风险和高龄孕妇（≥35岁），且本质上为回顾性研究。在过去几年间，NIPT已经作为一项产前筛查技术向高风险和高龄孕妇推荐，NIPT检测阳性孕妇后续仍需进行侵入性产前诊断。不过目前仍缺乏一项前瞻性的临床研究评价NIPT在低龄孕妇（35岁）中的检测效果。 方法 研究方案 在取得相关医院审查委员会认可的前提下，本研究预计收集来自北京协和医院和海淀区妇幼保健院至少2000例的低龄（35岁）单胎样本。所有受检孕妇均需进行中孕期血清学三联筛查。血清学筛查高风险（T21T18高风险）、超声检测异常或曾经具有染色体疾病患儿生育史的孕妇需在知情同意的基础上进行侵入性产前诊断。所有受检孕妇在选择接受本研究时均需签署书面的知情文件，研究采集孕妇5ml外周血，不重复抽血。所有外周血样采集后需立即送至北京贝瑞和康生物技术有限公司Berry Genomics Co, Ltd.）进行大规模平行测序检测，检测周期10个工作日。本研究为