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　　中药何首乌总基因组DNA的提取论文 【关键词】 何首乌；,,DNA提取；,,AFLP 摘要：目的为获得高质量的何首乌总基因组DNA。方法采用CTAB法提取，对其提取方法进行改进。结果用改进的方法提取的样品DNA的OD260/OD280值在1.630~1.955之间，琼脂糖凝胶上主带清晰、降解较少，能完全被限制性内切酶EcoR Ⅰ和MseⅠ完全酶切，得到合适的AFLP指纹样式。结论 改良的CTAB法提示提取何首乌DNA的理想方法，适合AFLP-PCR反应和其他分子生物学应用。 关键词：何首乌； DNA提取； AFLP Genomic DNA Extraction from the Polygonum multiflorum Thunb. Abstract：ObjectiveTo isolate high-quality genomic DNA from Polygonum multiflorum Thunb.MethodsCTAB isolation method odified in this paper.ResultsUsing the modified CTAB methods, the value of OD260/OD280 of DNAs plified by the polymerase chain reaction(PCR). Sharp fingerprint patterns of AFLP proved CTAB method al for analysis of AFLP-PCR and other molecular biology research. Key multiflorum Thunb.; DNA isolation; Amplified fragment length polymorphism 何首乌系多年生落叶草本植物，始载于《开宝本草》，又名乌肝石、赤首乌石、夜交藤,是蓼科Polygonaceae植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根,具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效,是滋补肝肾常用中药之一。产陕西南部、甘肃南部、华东、华中、华南、四川、云南及贵州.freel［1］。中药产地不同、品种不同，其成分、功效及药用品质就有很大的差异［2］。因此，准确鉴定何首乌品种是保证临床用药安全有效的前提。DNA分子标记技术的出现引起了人们的高度重视，目前已广泛应用于在中药的鉴定上。植物细胞除了具有细胞壁外，还含有大量的多糖、脂类、色素和酚类等次生物质，给基因组DNA的提取和纯化带来很多的困难，因此如何从中提取到高纯度的基因组DNA用于分子遗传分析是个关键的问题。由于不同的植物所含的次生物质不一样，因此，对不同的植物采取不同的DNA提取方法，以保证DNA的质量［2］。本文采用了改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA，探讨提取效果，并将各种方法提取的DNA用于AFLP扩增，从而筛选出适合于AFLP扩增的何首乌基因组DNA的提取方法。 1 器材与方法 1.1 材料何首乌叶片采自广东德庆县德城镇，经华南植物园邢富武教授鉴定，用干燥剂将叶片干燥后置于－20℃冰箱备用。 1.2 仪器Sigma 1-15K Centrifuge，Beckmen DU-530紫外分光光度计，GeneAmp PCR Systerm 2400(PERKIN ELMER)，水浴锅，研钵等。 1.3 试剂CTAB、尿素、Tris碱、EDTA、PVP40、RnaseA、β-巯基乙醇等购于北京鼎国生物公司（genevieer由上海生物工程有限公司合成，dNTP、Taq聚合酶、T4连接酶购自Takara宝生物（大连）有限公司,EcoR Ⅰ MseⅠ购自Nel eppendorf管中,加入1 ml 2%CTAB抽提缓冲液65℃保温45～60min, (2%CTAB抽提缓冲液：2%CTAB ，100 mmol/L Tris-HCl pH 8.0,.freelmol/L EDTA,1.4 mol/L NaCl, 2%巯基乙醇),期间轻缓颠倒摇动数次；取出eppendorf管，使之恢复室温，加入等体积氯仿-异戊醇(24∶1)抽提,轻缓颠倒混匀,室温下12 000 r/min离心10 min，吸取上清液；再加入等体积氯仿-异戊醇(24∶1)重复抽提1次,离心后吸取上清液加入2/3体积预冷异丙醇,混匀,-20℃下放置30 min或过夜,4 000 r/min离心10 min,小心去上清液,用70%乙醇洗涤1次,溶于200 μl 0.1TE（1.0 mmol/ Tris－HCl pH 8.0，0.1 mmolEDTA pH8.0）中,加入3～5 μl RNaseA储备液（10 mg/ml），在