人基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞增殖的影响论文.docVIP

　　人基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞增殖的影响论文 孔霞, 唐俊明, 郭凌郧, 杨建业,陈龙,黄永章,王家宁 【摘要】 目的：探索人基质细胞衍生因子1（SDF1）对间充质干细胞（MSC）增殖的影响. 方法：采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC, 通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记（CD133，CD34，CD90，CD105）等鉴定MSC特征；以P3MSC为实验材料，采用H3TdR参入法分析SDF1对MSC增殖的影响. 以50 nmol/L渥曼青霉素，10 mmol/L LY294002，50 mmol/L PD98059，0.1g/L AMD3100等分别处理P3MSC, 观察SDF1影响MSC增殖的信号机制. 结果：培养的MSC呈现出CXCR4.freelg/L SDF1的20 mL/L促进了MSC增殖，而含有100 mg/L SDF1的150 mL/L FBS抑制了MSC增殖. SDF1抑制MSC增殖的效应与其使MSC停滞在G1/S期有关. 促分裂原活化蛋白激酶P38MAPK阻断剂SB203580和CXCR4阻断剂AMD3100取消了SDF1抑制MSC增殖的效应，而细胞外信号调节激酶阻断剂PD98059加强了SDF1抑制MSC增殖的效应. 结论：SDF1/CXCR4介导的抑制MSC增殖的效应与促分裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶等信号分子有关. 【关键词】 人基质细胞源衍生因子1; 间充质干细胞;增殖;促分裂原活化蛋白激酶 【Abstract】 AIM: To explore the effect of stromal cellderived factor1 alpha (SDF-1α) on mesenchymal stem cell (MSC) proliferation. METHODS: MSC culture ed arroethod; MSC ultidifferentiation and surface marker assay (CXCR4, CD133, CD34, CD90,CD105); After MSCs g/L SDF1a,.freelol/L annin, 10 mmol/L LY294002, 50 mmol/L PD98059 and 0.1 g/L AMD3100 inhibitors, the proliferation rates easured by ［3H］thymidine incorporation assay. RESULTS: Cultured MSCs had the ability of multidifferentiation and highly expressed CXCR4, CD105 and CD90. 20 mL/L FBS including 100 mg/L SDF1a promoted MSC proliferation, hoL/L FBS including 100 mg/L SDF1a could induce marked inhibition of MSC proliferation through the arrest in the G1/S checkpoint. And its inhibitory effect on MSC proliferation itogenactivated protein kinase （MAPK） inhibitor SB203580 and CXCR4 inhibitor AMD3100. Hoesenchymal stem cell; proliferation; MAPK 0 引言 骨髓来源的间充质干细胞（bone marroesenchymal stem cell, MSC）在一定条件下可以分化为心肌、成骨、软骨、脂肪、胰岛、肌腱等多种类型的细胞［1］. 在心肌内、静脉内、冠脉内等不同途径移植MSC或粒系集落刺激因子动员骨髓发现其可以迁移到心肌梗死部位，通过参与血管新生、心肌再生等改善修复受损的心脏［1］. 有研究［2］发现，SDF1/CXCR4轴不仅调控造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）的迁移，而且也影响HSC的增殖和分化. 新近研究发现MSC表达CXCR4［3］，显示SDF1/CXCR4轴可介导MSC的迁移［4］. 但是就SDF1/CXCR4轴是否影响MSC的增殖分化，目前仍不清楚. 我们利用H3TdR参入法检测SDF1α对MSC增殖的影响，并初步探索SDF1α影响MSC增殖的信号机制. 1 材料和方法 1.1 材料 SPF级EM培养基（美国Gib